細胞簡介 ：

腎小球為血液過濾器 ，腎小球壁構成過濾膜 。腎小球過濾膜從內到外有三層結構 ：內層為內皮 、中層為腎小球基膜 、外層為上皮細胞層 ，上皮細胞又稱足細胞 ，其不規則突起稱足突 ，其間有許多狹小間隙 ，血液經濾膜過濾後 ，濾液入腎小球囊 。在正常情況下 ，血液中絕大部分蛋白質不能濾過而保留於血液中 ，僅小分子物質如尿素 、葡萄糖 、電解質及某些小分子蛋白能濾過 。

腎足細胞即腎小球上皮細胞 ，它附著於腎小球基底膜的外側 ，連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構成了腎小球血液濾過屏障 。又由於正常成年機體的腎髒足細胞是一種終末分化細胞 ，體外培養的原代細胞不能增殖 。

足細胞呈星型多突狀 ，胞體較大 ，由胞體伸出許多突起 ，呈指狀交叉覆蓋於腎小球基底膜外表麵 ，並通過黏附分子和蛋白多糖分子與腎小球基底膜相連 。足細胞在正常情況下可以分泌腎小球基底膜的主要組成成分 IV型膠原和纖維連接蛋白,在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解腎小球基底膜作用的基質金屬蛋白酶和組織蛋白酶 ，從而在腎小球基底膜的代謝平衡中發揮重要作用 。

細胞特性 ：

1）細胞來源於人正常腎髒組織 。

2)細胞鑒定 ：廣譜角蛋白（PCK）或WT-1（Wilm'sTumorProtein）熒光染色為陽性 。

3)經鑒定細胞純度高於90% 。

4)不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5)細胞生長方式 ：不規則 ，含足突細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 Delf 原代腎足細胞 培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。

公司正在出售的產品 ：

線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）測試盒

脂質運載蛋白相互作用膜受體蛋白抗體

LMBR1L

組織蛋白酶q抗體

Ctsq

精子卵子結合生成堿性螺旋蛋白2抗體  Anti-SOHLH2

磷酸化複製因子A蛋白2抗體  Anti-phospho-RPA32/RPA2(Thr21)

磷酸化IKB α抗體  Anti-Phospho-NFKBIA (Tyr42)

鋅指蛋白ZIC5抗體  Anti-ZIC5

E3連接酶MMS21蛋白抗體

NSE2/MMS21

甲型流感病毒血凝素2抗體

H1N1 Hemagglutinin 2

環指蛋白92抗體  Anti-TRIM11/RNF92

前列腺幹細胞抗原抗體  Anti-PSCA

蛋白磷酸酶非受體型4抗體  Anti-PTPN4/MEG1

絲蛋白酶抑製劑B11抗體  Anti-SERPINB11

磷酸化DDX58抗體

phospho-DDX58 (Ser8)

嗅覺受體5H2抗體

OR5H2

細胞核轉錄因子X盒結合蛋白抗體  Anti-XBP-1

神經細胞增殖和分化調控蛋白1抗體  Anti-NPDC1

DNA修複蛋白Rad50抗體  Anti-RAD50

溶質載體蛋白家族35成員C2抗體  Anti-SLC35C2

大鼠α1微球蛋白(α1-MG)elisa分析檢測試劑盒

大鼠CD68分子(CD68)elisa生化檢測試劑盒

CD68 ELISA kit

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人腎足細胞HDL1ELISAKit

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。