老哥俱乐部

细胞简介
：

食管癌是常见的六大恶性肿瘤之一，而我国是高发区之一。食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤。细胞主要呈多角形
，大小不等，胞浆丰富，胞核呈圆形或卵圆形，大小不等
。此外
，有研究表明，大部分来自于上皮的肿瘤细胞中均存在角蛋白。体外分离和培养食管癌细胞，为研究食管癌生物学特性、癌变机理等奠定了实验基础。

细胞特性：

1）细胞来源于人食管癌组织。

2)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

3)细胞生长方式
：多角形
，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 Delf原代肿瘤细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一、分离与培养

：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s


，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置


，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠巨噬细胞性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA 试剂盒

Rat ai myocardial aibody (AMA) ELISA Kit 大鼠抗心肌抗体(AMA)检测试剂盒

HumanMannmabindingprotein/mannanbindinglectin,MBP/MBLELISAKit 人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素(MBP/MBL)检测试剂盒 进口分装

Humanai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgA检测试剂盒人抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)检测试剂盒

植物果糖-1,6-二0酸缩酶(ALD)定量检测试剂盒20次

Humanβai-galactanproteinsIgGELISAKit人β乳糖蛋白抗体IgG检测试剂盒

HA重组甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

PDGF-BB peptide 血小板源性生长因子-BB抗原 0.5mgPDGF-BB peptide 血小板源性生长因子-BB抗原

IFNAR2重组人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白  Protein

AGA Protein Human 重组人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 (His 标签)

CCL1 Protein Human 重组人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白

PDGF-BB peptide 血小板源性生长因子-BB抗原 0.5mgPDGF-BB peptide 血小板源性生长因子-BB抗原

AGA Protein Human 重组人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 (His 标签)

HA重组甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein

CCL1 Protein Human 重组人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白

IFNAR2重组人 IFNAR2 / IFNABR 蛋白  Protein

猪Ⅲ型前胶原基端肽(PⅢ)ELISA 试剂盒

Human ai hepatitis D virus aibody (ai-HDV) ELISA Kit 人抗丁型肝病毒抗体(ai-HDV)检测试剂盒

PorcineTestoterone,TELISAKit 猪(T)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitfora-GluELISAKit大鼠α葡萄糖苷酶

血液比色法定量检测试剂盒

Mouseansferrieceptor,TFRELISAKit小鼠转铁蛋白受体(TFR/CD71)检测试剂盒

人食管癌细胞植物硝态氮测试盒   可见分光光度法   50管/48样

土壤铵态氮测试盒   可见分光光度法   50管/48样

土壤硝态氮测试盒   可见分光光度法   50管/48样

植物态氮测试盒   可见分光光度法   50管/48样