老哥俱乐部

细胞简介
：

角质形成细胞在基底层有一亚群
，即表皮干细胞
，它通过对称或不对称分裂产生短暂扩增细胞
，短暂扩增细胞经过几代扩增后便成为终末分化的表皮角质细胞

。表皮是一个可以持续自我更新的组织，因此表皮干细胞具有足够的增殖潜力，表皮干细胞不仅在体内平衡和创伤修复中其关键作用
，而且是肿瘤发生和基因的主要靶标

。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常皮肤组织
。

2)细胞鉴定
：p63与细胞角蛋白-14（CK-14）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 角质形成 细 胞培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告：

一
、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒

钾离子通道蛋白6抗体

KCNK6

ADP核糖基化因子样蛋白4抗体

ARL4

石蜡切片组织线粒体复合物I蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒

牛一氧化氮(NO)elisa分析检测试剂盒

球蛋白IgM试剂盒 R1
：45ml×1 R2：15ml×1 浊度法

小鼠抗双链DNA抗体（dsDNA）elisa检测试剂盒

肌球蛋白IG抗体

Myosin 1G

3号染色体开放阅读框31抗体

C3ORF31

味觉2型受体蛋白家族49抗体  Anti-TAS2R49

依赖的蛋白C轻链抗体  Anti-protein C light chain

神经肿瘤Nova2抗原抗体  Anti-Nova2

8-羟基脱氧鸟苷抗体  Anti-8-OHdG/8 Hydroxyguanosine

人乙型肝炎e抗原单克隆（检测）抗体

HBeAg(2E6)

DHX34蛋白抗体

DHX34

S100B蛋白抗体  Anti-S100B

神经生长因子受体相关蛋白1抗体  Anti-NADE/NGFRAP1

RAS的GTP酶激活蛋白抗体  Anti-RASA2

TBC结构域TBCD4蛋白抗体  Anti-TBCD4/TBC1D4

大鼠弹力蛋白酶elisa分析检测试剂盒

仓鼠核因子κB(NF-κB)elisa生化检测试剂盒

NF-κB Elisa Kit

人调宁蛋白-1(CNN1)elisa生化检测试剂盒

兔表皮干细胞CNN1ELISAKit