老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

肺巨噬细胞由单核细胞分化而来
，广泛分布在肺间质内
，在细支气管以下的管道周围和肺泡隔内较多。肺巨噬细胞的吞噬
、和分泌作用都十分活跃，有重要防御功能。吸入空气中的尘粒、等异物进入肺泡和肺间质，多被巨噬细胞吞噬
，故细胞胞质内常见尘粒、等物进入肺泡和肺间质，多被巨噬细胞吞噬，故细胞胞质内常见尘粒、次级溶酶体及吞噬体等。

肺巨噬细胞还可吞噬衰老的红细胞
，在心力衰竭患者出现肺瘀血时，大量红细胞从溢出，被巨噬细胞吞噬。吞噬异物的巨噬细胞，有的从肺泡腔经呼吸道粘液流动和纤毛运动而被咳出
，有的进入肺管随进入肺结内
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常肺组织
。

2)细胞鉴定：CD68或MAC387荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、
、酵母和

。

5)细胞生长方式：圆形，不规则细胞，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 巨噬 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

公司正在出售的产品：

小鼠脱氧酚/脱氧啉(DPD)ELISA 试剂盒

Rat anaphylatoxin / compleme fragme 4a (C4a) ELISA Kit 大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)检测试剂盒

HumanactivatedproteinC,APCELISAKit 人活化蛋白C(APC)检测试剂盒 进口分装

Chickenniicoxide,NO检测试剂盒鸡(NO)检测试剂盒

载玻片细胞P35蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseFollistatin,FSELISAKit小鼠卵泡抑素(FS)检测试剂盒

ACVR1重组狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白  Protein

Nrf2 peptide 核因子2相关因子2抗原 0.5mgNrf2 peptide 核因子2相关因子2抗原

CD40LG重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (His 标签) Protein

ALB Protein Human 重组 Human Serum Albumin / HSA / ALB 蛋白

COLEC10 Protein Mouse 重组小鼠 COLEC10 蛋白

Nrf2 peptide 核因子2相关因子2抗原 0.5mgNrf2 peptide 核因子2相关因子2抗原

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ACVR1重组狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白  Protein

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CD40LG重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (His 标签) Protein

猪白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA 试剂盒

Human ai BP180 aibody (BP180-Ab) ELISA Kit 人抗BP180抗体(BP180-Ab)检测试剂盒

PorcineIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 猪白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforALD(Humanaldosterone)ELISAKit人固同

血液镁离子(Mg)浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒20次

MouseVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit小鼠内脏脂肪特异性丝蛋白酶抑制剂(vaspin)检测试剂盒

兔肺巨噬细胞中文名称   方法   规格

人组织蛋白酶K(cath-K)ELISAKit   ELISA. 

人骨形成蛋白(BMPs)ELISAKit   ELISA. 

人醇结合蛋白4(RBP-4)ELISAKit   ELISA.

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。