老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1

、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

巩膜是眼球壁的外一层，由致密的胶原和弹力纤维构成，其结构坚韧
，不透明
。巩膜前缘接角膜缘，后方与视神经的硬膜鞘相延续
。巩膜由外向内分为：巩膜上层；主质层；巩膜下层。其中上层是由上皮细胞构成。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常眼组织
。

2)细胞鉴定
：广谱角蛋白(PCK)荧光染色为阳性
。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1
、 HBV、HCV、支原体
、、酵母和。

5)细胞生长方式
：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 上皮 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

公司正在出售的产品：

Mouseanti-nuclearAntibodyIgGELISAKit

大鼠Bcl-2样蛋白1(Bcl2-L-1/Bcl-X)elisa分析检测试剂盒

Bcl2-L-1/Bcl-X ELISA Kit

人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)elisa分析检测试剂盒

HumanHCⅡELISAKit

石蜡切片组织IP3R受体蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

犬α-3干扰素(IFN-α3)elisa检测试剂盒免费代测

大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)elisa检测试剂盒

小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)elisa检测试剂盒

Hermansky-Pudlak综合征蛋白4抗体

HPS4

肌动蛋白α3抗体

ACTG2

牛生长释放多肽(GHRP)elisa分析检测试剂盒

组织过氧化氢（HYDROGEN PEROXIDE）活性荧光定量检测试剂盒

小鼠巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa检测试剂盒免费代测

大鼠弹性蛋白(ELN)elisa检测试剂盒

原钙粘蛋白γA5抗体

PCDHGA5

组织蛋白酶H迷你链抗体

Cathepsin H mini chain

四分子交联体5抗体  Anti-Tetraspan 5

p21蛋白抗体  Anti-P21/CDKN1A

过氧化还原酶5/6抗体  Anti-PRDX5/PRDX6

突触相关蛋白23抗体  Anti-SNAP23

PE-Cy7标记的小鼠抗豚鼠IgG H&L

黑色素瘤相关抗原3抗体

MAGEA3

14号染色体开放阅读框130抗体

兔巩膜上皮细胞C14orf130

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息

，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。