老哥俱乐部

细胞简介：

是机体重要的器官。其功能与紧密相关，是 T细胞分化、发育、成熟的场所
，还可以分泌及类物质，具有技能的器官。

的表面有结缔组织被膜，结缔组织伸入实质把分成许多不分隔的小叶，这些结缔组织组织是由成纤维细胞构成，其作为支持细胞，对其他细胞起保护和支持作用。

细胞特性
：

1）组织来源于实验动物的正常组织。

2)细胞鉴定
：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%
。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体
、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF 原代 成纤维 细胞培养体系 作为体外培养的培养基
。

实验报告
：

一

、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次

，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

IL-1βELISAKit

鱼过氧化氢酶(CAT)elisa分析检测试剂盒

CAT ELISA kit

人补体7(C7)elisa分析检测试剂盒

HumanComplement7ELISAKit

植物过氧化氢酶（CATALASE）催化活性比色法定量检测试剂盒

人白色(C.albicans)elisa分析检测试剂盒

大鼠成纤维细胞生长因子21(FGF21)elisa检测试剂盒

小鼠岩藻糖基转移酶8(FUT8)elisa检测试剂盒

电压门控性钾通道蛋白Kv1.4抗体

Kv1.4

BCL6B抗体

BCL6B

维甲酸诱导蛋白6抗体  Anti-STRA6

磷酸化Rad51抗体  Anti-phospho-RAD51(Tyr315)

磷酸化中心粒蛋白Nudel抗体  Anti-phospho-NDEL1(Ser242)

锌指/环指蛋白4抗体  Anti-ZNRF4

跨膜蛋白SEMA4B抗体

SEMA4B

凝集胎盘蛋白1抗体

COLEC12

丝蛋白酶抑制剂B12抗体  Anti-SERPINB12

蛋白激酶9抗体  Anti-PTK9/TWF1

调亡诱导因子6相互作用蛋白/多巴胺受体相互作用蛋白4抗体  Anti-PDC6I/Alix

调节染色体组装激酶1抗体  Anti-TLK1

羊抗人IgA抗血清

A型流感病毒非结构蛋白1抗体

Influenza A Nonstructural Protein 1

锚蛋白重复结构域蛋白26抗体

兔胸腺成纤维细胞ANKRD26