老哥俱乐部

细胞简介
：

甲状腺是人体大的腺。棕红色，分左右两叶，中间相连，呈 H形
。甲状腺滤泡是甲状腺的基本结构单位，滤泡外周是一层排列整齐的上皮细胞

，甲状腺上皮细胞是甲状腺合成和释放的部位
，滤泡腔内充满均匀的胶性物质

，是甲状腺复合物，也是甲状腺的贮存库
。同时，上皮细胞具有强大的吸收碘化物的能力。甲状腺体活动减弱时，上皮细胞呈扁平状
。

细胞特性：

1）组织来源于实验动物的正常甲状腺组织。

2)细胞鉴定
：甲状腺球蛋白（Tg）荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和
。

5)细胞生长方式
：铺路石状细胞，不规则细胞
，贴壁培养。

推荐培养基
：

老哥俱乐部推荐使用 DELF原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6

、用PBS冲洗3次
，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)elisa检测试剂盒

小鼠分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)elisa检测试剂盒

豚鼠组胺(HIS)elisa检测试剂盒

冰冻切片组织RyR受体蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

犬I 型胶原蛋白elisa分析检测试剂盒

大鼠肾上腺髓质素（AM）基因重组表达载体（pcDNA-AM）

人高密度脂蛋白2(HDL2)elisa分析检测试剂盒

大鼠胱抑素SA(CST2)elisa检测试剂盒

植物胞质蛋白提取试剂盒100T

乙酰化化组蛋白H2B (Lys23)鼠单克隆抗体 Histone H2B (Acetyl K23)

有机溶质载体蛋白1抗体 OSCP1

二肽基肽酶6抗体 DPP6

防御素β-109/β-defensin 109抗体 DEFB109

GRRP1蛋白抗体 GRRP1

G蛋白偶联受体25抗体 GPR25

囊性纤维化跨膜转运调节因子抗体 CFTR

尼曼匹克C1前体蛋白抗体 NPC1

AF488标记的信号转导和转录激活因子5抗体 STAT5, Alexa Fluor 488 conjugated

AF680标记的转录因子OTX1抗体 OTX1, Alexa Fluor 680 conjugated

胶质瘤发病相关蛋白1抗体 GLIPR1L1

精氨酰tRNA合成酶抗体 Arginyl tRNA synthetase

SET易位蛋白/髓系白血病相关蛋白抗体 SET

Synaptophysin单克隆抗体 Synaptophysin

源盒蛋白HOXB1抗体 HOXB1

晚期角质化包膜蛋白抗体 LCE6A

合成酶（GS)测试盒

基质重塑相关蛋白8抗体 MXRA8

小鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa检测试剂盒

酒类尿素比色法定量检测试剂盒

小鼠甲状腺上皮细胞酵母蛋白裂解液100ml