洗滌方法 :
1. 自動洗板機 :每孔加入洗滌液350μl ,注入與吸出間隔60秒 。洗板5次 。
2. 手工洗板 :甩盡孔內液體 ,在潔淨的吸水紙上拍幹 ,每孔加洗滌液350μl ,浸泡1-2分鍾 ,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體 ,在厚的吸水紙上拍幹 。洗板5次 。
實驗開始前 ,各試劑均應平衡至室溫 ;試劑或樣品配製時 ,均需充分混勻 ,並盡量避免起泡 。
1.加樣 :分別設空白孔 、標準孔 、待測樣品孔 。空白孔加樣品稀釋液100μl ,餘孔分別加標準品或待測樣品100μl ,注意不要有氣泡 ,加樣時將樣品加於酶標板底部 ,盡量不觸及孔壁 ,輕輕晃動混勻 。給酶標板覆膜 ,37℃孵育2小時 。為保證實驗結果有效性 ,每次實驗請使用新的標準品溶液 。
2.棄去液體 ,甩幹 ,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鍾內配製) ,酶標板加上覆膜 ,37℃溫育1小時 。
3.棄去孔內液體 ,甩幹 ,洗板 3次 ,每次浸泡1-2分鍾 ,大約350μl /每孔 ,甩幹並在吸水紙上輕拍將孔內液體拍幹 。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鍾內配製)100μl ,加上覆膜 ,37℃溫育1小時 。
5.棄去孔內液體 ,甩幹 ,洗板5次 ,方法同步驟3 。
6.每孔加底物溶液100μl ,酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鍾左右(根據實際顯色情況酌情縮短或延長 ,但不可超過30分鍾 。當標準孔出現明顯梯度時 ,即可終止) 。
7.每孔加終止液50μl ,終止反應 ,此時藍色立轉黃色 。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同 。
8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值) 。應提前打開酶標儀電源 ,預熱儀器 ,設置好檢測程序 。
9.實驗完畢後將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束 。
雌激素受體α抗體
ENPP3抗體IgG
絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
胚胎幹細胞RAS蛋白抗體
轉錄因子ETV7抗體
ELAVL1抗體
胚胎幹細胞相關轉錄因子1抗體
表皮生長因子受體III型突變體抗體
紅細胞膜蛋白條帶EPB41L5抗體
早期發育調控蛋白1抗體
轉錄因子ETV6抗體
跨膜通道蛋白8抗體
尤文氏肉瘤相關EWS蛋白抗體
核酸外切酶1抗體
多發性肌炎/硬皮病自身抗原抗體2抗體
核糖體RNA合成蛋白40抗體
核糖體RNA合成蛋白42抗體
多發性外生骨疣樣蛋白3抗體
轉錄因子EYA1抗體
磷酸化埃茲蛋白抗體
嗜酸性粒細胞陽離子蛋白抗體
E1A樣分化抑製因子3抗體
骨骼肌烯醇化酶抗體
真核翻譯起始因子2C1抗體
磷酸化eIF4E結合蛋白抗體
附睾蛋白酶抑製蛋白