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人剛地弓形蟲(T.gondii)elisa試劑盒操作步驟
點擊次數 :565 更新時間 :2021-09-14

操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣 :在酶標包被板上設標準品孔10孔 ,在di一 、第二孔中分別加標準品100μl ,然後在di一 、第二孔中加標準品稀釋液50μl ,混勻 ;然後從di一孔 、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔 ,再在第三 、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻 ;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉 ,再各取50μl分別加到第五 、第六孔中 ,再在第五 、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ,混勻 ;混勻後從第五 、第六孔中各取50μl分別加到第七 、第八孔中 ,再在第七 、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl ,混勻後從第七 、第八孔中分別取50μl加到第九 、第十孔中 ,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl ,混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉 。(稀釋後各孔加樣量都為50μl ,濃度分別為180 ng/L ,120 ng/L  ,60 ng/L ,30 ng/,15 ng/L) 。

2. 加樣 :分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ,其餘各步操作相同) 、待測樣品孔 。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl ,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍) 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ,盡量不觸及孔壁 ,輕輕晃動混勻 。

3. 溫育 :用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。

4. 配液 :將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用 。

5. 洗滌 :小心揭掉封板膜 ,棄去液體 ,甩幹 ,每孔加滿洗滌液 ,靜置30秒後棄去 ,如此重複5次 ,拍幹 。

6. 加酶 :每孔加入酶標試劑50μl ,空白孔除外 。

7. 溫育 :操作同3 。

8. 洗滌 :操作同5 。

9. 顯色 :每孔先加入顯色劑A50μl ,再加入顯色劑B50μl ,輕輕震蕩混勻 ,37℃避光顯色15分鍾.

10. 終止 :每孔加終止液50μl ,終止反應(此時藍色立轉黃色) 。

11. 測定 :以空白空調零 ,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 。 測定應在加終止液後15分鍾 。

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