老哥俱乐部

操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一
、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀
；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl

，混匀
；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七

、第八孔中
，再在第七
、第八孔中分别加标准品稀释液50μl
，混匀后从第七
、第八孔中分别取50μl加到第九
、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/
，15 ng/L）
。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂
，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀
。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜
，弃去液体，甩干

，每孔加满洗涤液
，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl
，空白孔除外。

7. 温育
：操作同3
。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）
。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

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