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艱難梭菌(TCD-B)核酸檢測試劑盒反應的特異性決定因素
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:845 更新時間
:2021-01-07
反應的特異性決定因素 :
①引物與模板DNA特異正確的結合
;
②堿基配對原則
;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性
;
④靶基因的特異性與保守性
。
其中引物與模板的正確結合是關鍵
。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的
。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性
,使反應中模板與引物的結合(複性)可以在較高的溫度下進行
,結合的特異性大大增加
,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度
。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區
,其特異性程度就更高
。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的
,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平
。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞
;在病毒的檢測中
,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)
;在細菌學中zui小檢出率為3個細菌
。
(3) 簡便
、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶
,一次性地將反應液加好後
,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應
,一般在2~4 小時完成擴增反應
。擴增產物一般用電泳分析
,不一定要用同位素,無放射性汙染
、易推廣
。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞
,DNA 粗製品及總RNA均可作為擴增模板
。可直接用臨床標本如血液
、體腔液
、洗嗽液
、毛發
、細胞
、活PCR技術概論
。