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温和气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒操作步骤
点击次数：872 更新时间：2020-07-23
操作步骤 ：
一 、样品采集 ：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行 。
2、血液样品 ：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管 ，立即混匀。
3、粪便样品 ：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品 ：取发病部位新鲜渗出物 、粘液脓血送检。
一 、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分） 。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照 ，只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管 ，分别为 7，6，5，4，3，2 。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头 ，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟 ，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照 。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。