結合物即酶標記的抗體(或抗原)
,是ELISA中zui關鍵的試劑
。良好的結合物應該是既保有酶的催化活性
,也保持了抗體(或抗原)的免疫活性
。結合物中酶與抗體(或抗原)之間有恰當的分子比例
,在結合試劑中應盡量不含有或少含有遊離的(未結合的)酶或遊離的抗體(或抗原)
。此外
,結合物尚要有良好的穩定性
。
用於ELISA的酶應符合以下要求
:純度高
,催化反應的轉化率高
,專一性強
,性質穩定
,來源豐富
,價格不貴
,製備成酶結合物後仍繼續保留它的活性部分和催化能力
。在受檢標本中不存在相同的酶
。另外
,它的相應底物易於製備和保存
,價格低廉
,有色產物易於測定等
。 在ELISA中
,常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和堿性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP)
。在少數商品ELISA試劑中
,應用的酶尚有葡萄糖氧化酶
、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等
。 國產ELISA試劑一般都用HRP製備結合物
。HRP是一種糖蛋白
,含糖量約為18%
,分子量為44000
,是一種複合酶
,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結合而成
,是一種卟啉蛋白質
。主酶無色糖蛋白在275nm波長處有吸收峰
,輔基是深棕色的含鐵卟啉環
,在403nm波長處有吸收峰
。HRP的純度用RZ(Reinheit Zahl,德文
,意為純度數)表示
,是403nm的吸光度與280nm吸光度之比
,高純度的HRP的RZ≥9.0
。 HRP除符合上述的ELISA中標記酶的要求外
,更有價格低廉和性質較穩定的特點
。值得注意的是
,在選用酶製劑時
,除其純度RZ外
,更應注意酶的活力
。高純度的酶如保存不當
,活力也會降低
。酶製劑的活力以所含的酶活力單位表示
,可用對底物作用後生成產物量的測定進行試驗
。
國外很多試劑采用堿性磷酸酶(AP)作為標記酶
。常用的AP有兩個來源
,分別從大腸杆菌和小牛腸膜中提取
。不同來源的酶生化特性特性略不相同
,從大腸杆菌中提取的AP分子量為80000
,酶作用的pH為8.0
;用小牛腸膜中提取的AP分子量為100000
,zui適pH為9.6
。在ELISA中
,AP係統的敏感度一般高於HRP係統
,空白值也較低
,但AP價格昂貴
,製備結合物所得率也較HRP低
。
300mg 78439-06-2 五水合物標準品 Ceftazidime Pentahydrate
300mg 類薑黃素標準品 Curcuminoids
300mg 5870-29-1 鹽酸環噴托酯標準品 Cyclopentolate Hydrochloride
300mg 2438-32-6 馬來酸右標準品 Dexchlorpheniramine Maleate
300mg 562-10-7 琥珀酸多西拉敏標準品 Doxylamine Succinate
300mg 8067-24-1 甲磺酸雙氫麥角堿標準品 Ergoloid Mesylates
300mg 13517-23-2 依替膦酸鈉相關物質A標準品 Etidronate Disodium
300mg 75607-67-9 標準品 Fludarabine Phosphate
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