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胎盤泌乳素Elisa試劑盒的操作步驟
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:710 更新時間
:2016-07-25
胎盤泌乳素Elisa試劑盒是基於經典酶聯夾心技術原理
,隻能用於研究用途
,不得用於醫學診斷
。樣品和標記抗體先後加入酶標板孔反應後
,PBS或TBS洗滌
。隨後加入過氧化物酶標記的親和素反應
;經過PBS或TBS的*洗滌後用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色
,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色
。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關
。
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目 。
2.將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中 ,1孔隻加樣品稀釋液的作為對照 。處理後的標本按100ul每孔加入 。
3.酶標板加上蓋 ,37℃反應90分鍾 。
4.反應後用自動洗板機吸去酶標板內的液體 ;或甩去酶標板內液體 ,再對著吸水紙拍幾下 。洗滌2次。
5.將準備好的抗體工作液按每孔0.1ml依次加入 。37℃反應60分鍾 。
6.0.01MTBS或0.01MPBS洗滌3次 ,每次浸泡1分鍾左右 。
7.將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入 。37℃反應30分鍾 。
8.0.01MTBS或0.01MPBS洗滌5次 ,每次浸泡1-2分鍾左右 。
9.按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液 ,37℃避光反應 ,反應過程中 ,要經常的觀察 ,當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色 ,後3-4孔差別不明顯時 ,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應zui長不要超過30分鍾) 。
10.用酶標儀在450nm測定O.D.值 。
11.根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度 。用戶也可以使用各種應用軟件來計算 。應記住由於樣品稀釋了N倍 ,其實際濃度應該×N 。 上一篇 紫外線消毒器優勢和原理 下一篇 如何選擇合適的定量PCR儀
1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目 。
2.將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中 ,1孔隻加樣品稀釋液的作為對照 。處理後的標本按100ul每孔加入 。
3.酶標板加上蓋 ,37℃反應90分鍾 。
4.反應後用自動洗板機吸去酶標板內的液體 ;或甩去酶標板內液體 ,再對著吸水紙拍幾下 。洗滌2次。
5.將準備好的抗體工作液按每孔0.1ml依次加入 。37℃反應60分鍾 。
6.0.01MTBS或0.01MPBS洗滌3次 ,每次浸泡1分鍾左右 。
7.將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入 。37℃反應30分鍾 。
8.0.01MTBS或0.01MPBS洗滌5次 ,每次浸泡1-2分鍾左右 。
9.按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液 ,37℃避光反應 ,反應過程中 ,要經常的觀察 ,當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色 ,後3-4孔差別不明顯時 ,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應zui長不要超過30分鍾) 。
10.用酶標儀在450nm測定O.D.值 。
11.根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度 。用戶也可以使用各種應用軟件來計算 。應記住由於樣品稀釋了N倍 ,其實際濃度應該×N 。 上一篇 紫外線消毒器優勢和原理 下一篇 如何選擇合適的定量PCR儀