水溶液中的氨基酸為兼性離子 ,因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基 。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結合 ,形成—NH—CH2OH 、—N(CH2—OH)2 等羥甲基衍生物 ,使N+H3上的H+遊離出來 ,這樣就可以用堿滴定N+H3放出H + ,測出氨基氮,從而計算氨基酸的含量 。
若樣品中隻含有單一的已知氨基酸 ,則可由此法滴定的結果算出氨基酸的含量 。若樣品中含有多種氨基酸(如蛋白質水解液) ,測不能由此法算出氨基酸的含量 。
與甲醛作用後 ,生成的化合物不穩定 ,導致滴定後結果偏低 ;含酚基結構 ,導致滴定結果偏高 。
測定氨基酸含量的材料 、試劑與器具
(一)試劑
1 、0.5%酒精溶液
稱0.5g溶於100ml60%酒精中 。
2 、0.05%溴藍溶液
取0.05溴麝行草酚藍溶於100ml 20%乙醇溶液中 。
3 、1%溶液
取1g溶於100ml蒸餾水 。
4 、標準0.100mol/L 氫氧化鈉溶液
5 、中性甲本醛溶液
取50ml ,加0.5%指示劑約3ml ,滴加0.1mol/LnaOH溶液 ,使溶液呈微粉紅色 ,臨用前中和 。
(二)實驗器具
1 、錐形瓶 2 、堿式滴定管
3 、 移液管洗耳球 4 、天平
5 、容量瓶 6 、試劑瓶
7 、量筒 8 、玻棒與燒杯
注意事項 :利用甲醛滴澱法可以用來測定蛋白質的水解程度 。隨著蛋白質水解度的增加,滴定值也增加 ,當蛋白質水解完成後,滴定值不再增加 。
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