對流免疫電泳是在瓊脂擴散基礎上結合電泳技術而建立的一種簡便而快速的方法 。此方法能在短時間內出現結果 ，故可用於快速診斷 ，敏感性比雙向擴散技術高10-15倍 。

    血清蛋白在PH8.6條件下帶負電荷，所以在電場作用下都向E極移動 。但由於分子在這樣的PH條件下隻帶微弱的負電荷 ，而且它的分子量又較大（為r球蛋白） 。所以遊動慢 。更重要的是抗體分子受電滲作用影響較大 ，也就是說點滲作用大於它本身的遷移率 。所謂電滲作用是指在電場中溶液對於一個固定固體的相對移動 。瓊脂是一種酸性物質 ，在堿性緩衝液中進行電泳 ，它帶有負電荷 ，而與瓊脂相接觸的水溶液就帶正電荷 ，這樣的液體便向負極移動 。抗體分子就是隨著帶正電荷的液體向負極移動的 。而一般的蛋白質（如血清抗原）也受電滲作用的影響 ，使泳動速度減慢 ，但它的電泳遷移率遠遠大於電滲作用 。這樣抗原體就達到了定向對流 ，在兩者相遇且比例合適時便形成肉眼可見的沉澱線 。

（一）材料

1 、診斷血清 ：免抗人免疫血清

2 、待檢血清 ：人血清

3 、陰性對照血清

4 、pH8.6 、離子強度0.05M緩衝液配方 ：1.84克 ，鈉10.3克 ，加蒸餾水1000毫升 ，調pH至8.6 。

5 、緩衝瓊脂板 ：將純化的瓊脂用PH8.6離子強度0.025的緩衝液（用0.05M的緩衝液稀釋一倍即可）配成1.5%的瓊脂 ，加入 0.01-0.02%流柳汞防腐 ，保存冰箱內備用 。

6 、電泳儀

7 、其他 ：生理鹽水 、打孔器 、微量進樣器

（二）方法

1 、瓊脂板的製備根據需要可選用大玻板（6厘米×9厘米）和（小玻片）兩種 。大玻板約需瓊脂10毫升 ，小玻片約需3.5毫升 ，凝固後按圖打孔 ，方法同瓊脂擴散實驗 。

2 、加樣 ：左側孔內加患者血清（原血清及10倍稀釋血清各占一孔） ，右側內加抗血清 ，每片應有陽性對照 。

3 、電泳

    用國產普通電泳儀 。其內加0.05mPH8.6的緩衝液 ，加至電泳槽高度的三分之二處 ，注意兩槽內液麵盡量水平 。將加好樣品的玻板置於電泳槽上 ，抗原端接負極 ，端接正極 ，用2—4層濾紙浸濕作鹽橋 ，濾紙與瓊脂板聯接處為0.5厘米 。以板寬度計算電流 ，以板的長度計算電壓 。要求電流量為2— 3毫安/厘米 ，即大板為20毫安 ，小板為10毫安 。電壓為4—6伏/厘米 。通電45分鍾—2小時後觀察結果 。

4 、結果觀察

    在黑色背景上方 ，用散射光多個角度觀察 ，在對孔之間有白色沉澱線即為陽性對照應出現明顯的白色沉澱線 。如果抗原 ，兩極微沉澱條紋不清晰 ，於37℃保溫數小時可增強沉澱條紋的清晰度 。

5 、影響結果的因素

（1）抗原抗體的比例 ：抗原抗體比例適應時容易出現沉澱帶 ，反之不易發生 。當抗體濃度恒定時 ，被檢血清含甲胎蛋白濃度高時，作10倍 、20倍或更高倍數稀釋可以提高陽性率 。隨稀釋度的增加 ，抗原抗體的比例發生變化，沉澱線由靠近抗血清孔向逐步移向兩孔中間 ，並可出現不典型的沉澱線如弧形 、八字須形 、斜線形 ，這些也是陽性 ，應予注意 。

（2）組電泳緩衝液其電泳結果以鈉—鹽酸緩衝液靈敏度zui高 。—鈉次之 。Tris緩衝液更差 。

（3）電壓與電流時電泳時間需要長些 ：電壓電流增大時 ，電泳時間可更短 。但電壓過高則孔徑變形 ，電流過大抗原蛋白易變性 ，幹擾實驗結果 。一般選擇每厘米5毫升 ，電泳時間改為1.5小時.

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