老哥俱乐部

培养基及培养冻存条件准备：

1）准备 角质细胞无血清培养基或者 Defined K-SFM  
，添加对应因子，1% P/S 来培养细胞。

备注:Defined K-SFM培养液包含两个组份：基础培养基1瓶+生长因子1管

2）培养条件
： 气相
：空气，95%；二氧化碳，5%
。 温度
：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：培养液92.5%，7.5%DMSO，现用现配。

4）传代比例：如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是1:2。传代周期：4-6天，换液频率：每周 2-3次
。

备注：

1. 该细胞贴壁较慢，为使细胞贴壁更容易

，建议可提前在培养皿/培养瓶中铺0.25%的明胶溶液，并于贴壁24~48小时后再进行后续操作。

2. 该细胞生长不能过密
，请在生长密度80%时进行传代。

3.使用0.05%消化细胞，由于Defined K-SFM为无血清培养液无法终止消化
，所以消化完成后要通过离心（建议125xg离心5到10分钟）去除或者用带10%血清的培养基来终止消化，再进行后续操作
。

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