培養基及培養凍存條件準備 ：

1）準備 角質細胞無血清培養基或者 Defined K-SFM   ，添加對應因子 ，1% P/S 來培養細胞 。

備注:Defined K-SFM培養液包含兩個組份 ：基礎培養基1瓶+生長因子1管

2）培養條件 ： 氣相 ：空氣 ，95% ；二氧化碳 ，5% 。 溫度 ：37℃ ，培養箱濕度為70%-80% 。

3）凍存液 ：培養液92.5% ，7.5%DMSO ，現用現配 。

4）傳代比例 ：如果沒有特別說明 ，收到細胞後的第一次傳代一般是1:2 。傳代周期 ：4-6天 ，換液頻率 ：每周 2-3次 。

備注 ：

1. 該細胞貼壁較慢 ，為使細胞貼壁更容易 ，建議可提前在培養皿/培養瓶中鋪0.25%的明膠溶液 ，並於貼壁24~48小時後再進行後續操作 。

2. 該細胞生長不能過密 ，請在生長密度80%時進行傳代 。

3.使用0.05%消化細胞 ，由於Defined K-SFM為無血清培養液無法終止消化 ，所以消化完成後要通過離心（建議125xg離心5到10分鍾）去除或者用帶10%血清的培養基來終止消化 ，再進行後續操作 。

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