操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣 ：在酶標包被板上設標準品孔10孔 ，在di一 、第二孔中分別加標準品100μl ，然後在di一 、第二孔中加標準品稀釋液50μl ，混勻 ；然後從di一孔 、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔 ，再在第三 、第四孔分別加標準品稀釋液50μl ，混勻 ；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉 ，再各取50μl分別取50μl分別加到第七 、第八孔中 ，再在第七 、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl ，混勻後從第七 、第八孔中加到第五 、第六孔中 ，再在第五 、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ，混勻 ；混勻後從第五 、第六孔中各分別取50μl加到第九 、第十孔中 ，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl ，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉 。（稀釋後各孔加樣量都為50μl ，濃度分別為180 ng/L ，120 ng/L ，60 ng/L ，30 ng/，15 ng/L） 。
2. 加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同） 、待測樣品孔 。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl ，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。
3. 溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。
4. 配液 ：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用 。
5. 洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。
6. 加酶 ：每孔加入酶標試劑50μl ，空白孔除外 。
7. 溫育 ：操作同3 。
8. 洗滌 ：操作同5 。
9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑A50μl ，再加入顯色劑B50μl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止 ：每孔加終止液50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。 測定應在加終止液後15分鍾 。