樣品RNA的抽提 ：

①取凍存已裂解的細胞 ，室溫放置5分鍾使其*溶解 。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的 ，蓋緊管蓋 。手動劇烈振蕩管體15秒後 ，15到30℃孵育2到3分鍾 。4℃下12000rpm離心15分鍾 。離心後混合液體將分為下層的紅色酚相 ，中間層以及無色水相上層 。RNA全部被分配於水相中 。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60% 。③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中 。加等體積異丙醇混合以沉澱其中的RNA ，混勻後15到30℃孵育10分鍾後 ，於4℃下12000rpm 離心10分鍾 。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側壁上形成膠狀沉澱塊 。

④RNA清洗 移去上清液 ，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配製） ，清洗RNA沉澱 。混勻後 ，4℃下7000rpm離心5分鍾 。

⑤RNA幹燥 小心吸去大部分乙醇溶液 ，使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-10分鍾。

⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時 ，先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次 ，使其*溶解 ，獲得的RNA溶液保存於-80℃待用 。

2 RNA質量檢測

1）紫外吸收法測定

先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零 。然後取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）後 ，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值 ，測定RNA溶液 濃度和純度 。

① 濃度測定

A260下讀值為1表示40 g RNA/ml 。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為 ：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml 。

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