注意事項如下 ：
1. 正式試驗時 ，應分別以陽性對照與陰性對照控製試驗條件 ，待檢樣品應作一式二份 ，以保證實驗結果的準確性 。有時本底較高 ，說明有非特異性反應 ，可采用羊血清 、兔血清或BSA等封閉 。
2. 在ELISA中 ，進行各項實驗條件的選擇是很重要的 ，其中包括:
（1） 固相載體的選擇 ：許多物質可作為固相載體 ，如聚氯乙烯 、聚苯乙烯 、聚丙酰胺和纖維素等 。其形式可以是凹孔平板 、試管 、珠粒等 。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板 。不管何種載體 ，在使用前均可進行篩選 ：用等量抗原包被 ，在同一實驗條件下進行反應 ，觀察其顯色反應是否均一性 ，據此判明其吸附性能是否良好 。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇 ：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表麵時 ，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間 。吸附溫度 ，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時 。蛋白質包被適濃度需進行滴定 ：即用不同的蛋白質濃度（0.1 、1.0和10μg／ml等）進行包被後 ，在其它試驗條件相同時 ，觀察陽性標本的OD值 。選擇OD值而蛋白量少的濃度 。對於多數蛋白質來說通常為1～10μg／ml 。
（3） 酶標記抗體工作濃度的選擇 ：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份） 。然後再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物 、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度 。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇 ：對供氫體的選擇要求是價廉 、安全 、有明顯地顯色反應 ，而本身無色 。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用 ，應注意防護 。有條件者應使用不致癌 、靈敏度高的供氫體 ，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體 。底物作用一段時間後 ，應加入強酸或強堿以終止反應 。通常底物作用時間，以10-30分鍾為宜 。底物使用液必須新鮮配製 ，尤其是H2O2在臨用前加入 。