細胞簡介 ：

肝髒是身體內以代謝功能為主的一個器官 ，並在身體裏麵起著去氧化 、儲存肝糖 、分泌性蛋白質的合成等作用。肝髒是尿素合成的主要器官 ，又是新陳代謝的重要器官。肝髒對來自體內和體外的許多非營養性物質如各種 、毒物以及體內某些代謝產物 ，具有生物轉化作用 。通過新陳代謝將它們分解或以原形排出體外 。在肝中及外圍有部分結締組織 ，這些結締組織是由成纖維細胞組成 。

細胞特性 ：

1） 細胞來源於實驗動物正常肝髒組織 。

2) 細胞鑒定 ：Vimentin熒光染色為陽性 。

3) 經鑒定細胞純度高於90% 。

4) 不含有 HIV-1 、 HBV 、HCV 、支原體 、 、酵母和 。

5) 細胞生長方式 ：長梭狀 ，不規則細胞 ，貼壁培養 。

推薦培養基 ：

老哥俱樂部推薦使用 Delf 原代成纖維 細胞 培養體係 作為體外培養的培養基 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠信號素3A(SEMA3A)elisa檢測試劑盒

著絲粒蛋白X抗體

MHF2/CENPX

1號染色體開放閱讀框185抗體

C1orf185

胚胎幹細胞胰島細胞定向分化試劑盒

大鼠吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)elisa檢測試劑盒

血液脯（proline）含量比色法定量檢測試劑盒

小鼠Zeste源物增強子1(EZH1)elisa檢測試劑盒

磷酸肌醇3激酶接頭蛋白1抗體

PIK3AP1

卷曲螺旋結構域蛋白65抗體

CCDC65

四分子交聯體17抗體（四旋蛋白）  Anti-TSPAN17/FBX23

蛋白酶體PRS7抗體  Anti-Proteasome 19S S7

磷酸化心髒磷蛋白抗體  Anti-phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)

芳基磺基轉移酶1抗體  Anti-SULT1A1

APC標記的兔抗人IgA

Rabbit Anti-Human IgA / APC

長鏈脂肪酸延長酶長ELOVL6抗體

ELOVL6

受精卵抑製蛋白1樣蛋白抗體  Anti-ZAR1L

NFKB激活蛋白抗體  Anti-NKAP

抵抗素抗體  Anti-Resistin

Syndecan 3蛋白抗體  Anti-Syndecan 3

大鼠1,25二羥基3(1,25 DHVD3)elisa分析檢測試劑盒

大鼠D二聚體(D2D)elisa檢測試劑盒

小鼠剪接因子3B亞基3(SF3B3)elisa檢測試劑盒

血清蛋白提取試劑盒100T

大鼠肝成纖維細胞體液氧化型甘肽（GSSG）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。