老哥俱乐部

细胞简介：

肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面起着去氧化、储存肝糖
、分泌性蛋白质的合成等作用。肝脏是尿素合成的主要器官
，又是新陈代谢的重要器官。肝脏对来自体内和体外的许多非营养性物质如各种、毒物以及体内某些代谢产物，具有生物转化作用。通过新陈代谢将它们分解或以原形排出体外。在肝中及外围有部分结缔组织
，这些结缔组织是由成纤维细胞组成
。

细胞特性：

1） 细胞来源于实验动物正常肝脏组织

。

2) 细胞鉴定

：Vimentin荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%
。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV
、支原体、
、酵母和。

5) 细胞生长方式：长梭状

，不规则细胞
，贴壁培养
。

推荐培养基：

老哥俱乐部推荐使用 Delf 原代成纤维 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。

实验报告
：

一、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品：

大鼠信号素3A(SEMA3A)elisa检测试剂盒

着丝粒蛋白X抗体

MHF2/CENPX

1号染色体开放阅读框185抗体

C1orf185

胚胎干细胞胰岛细胞定向分化试剂盒

大鼠吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)elisa检测试剂盒

血液脯（proline）含量比色法定量检测试剂盒

小鼠Zeste源物增强子1(EZH1)elisa检测试剂盒

磷酸肌醇3激酶接头蛋白1抗体

PIK3AP1

卷曲螺旋结构域蛋白65抗体

CCDC65

四分子交联体17抗体（四旋蛋白）  Anti-TSPAN17/FBX23

蛋白酶体PRS7抗体  Anti-Proteasome 19S S7

磷酸化心脏磷蛋白抗体  Anti-phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)

芳基磺基转移酶1抗体  Anti-SULT1A1

APC标记的兔抗人IgA

Rabbit Anti-Human IgA / APC

长链脂肪酸延长酶长ELOVL6抗体

ELOVL6

受精卵抑制蛋白1样蛋白抗体  Anti-ZAR1L

NFKB激活蛋白抗体  Anti-NKAP

抵抗素抗体  Anti-Resistin

Syndecan 3蛋白抗体  Anti-Syndecan 3

大鼠1,25二羟基3(1,25 DHVD3)elisa分析检测试剂盒

大鼠D二聚体(D2D)elisa检测试剂盒

小鼠剪接因子3B亚基3(SF3B3)elisa检测试剂盒

血清蛋白提取试剂盒100T

大鼠肝成纤维细胞体液氧化型甘肽（GSSG）浓度高效液相色谱定量检测试剂盒

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基

、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。