老哥俱乐部

细胞简介：

猪主动脉平滑肌分离自主动脉组织
；主动脉是体循环的动脉主干。其运行路径为
：升主动脉起于左心室
，至右侧第2胸肋关节高度移行为主动脉弓
，弓行向左后至第4胸椎体下缘移行为降主动脉；在第12胸椎体高度穿膈的主动脉裂孔移行为腹主动脉
，以上为胸主动脉
，至第4腰椎体下缘分为左、右髂总动脉；髂总动脉在骶髂关节高度分为髂内、外动脉
。主动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展
，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中
；2周后细胞汇合
，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起
，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点
。主动脉平滑肌细胞在心血管疾病发生、发展中具有重要作用，以主动脉平滑肌细胞为实验研究对象，探讨心血管疾病相关发病机制是目前研究的热点
；体外培养的主动脉平滑肌细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

实验室分离的猪主动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的猪主动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2
，5%

猪主动脉平滑肌体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

酸性酯酶染液   Eosinstain

中性酯酶染液   H-E dye

碱性酯酶染液   Wright'dye

双重酯酶染液   Wright - Giemsa dye composite

G蛋白信号转导调节因子7抗体

EGF样域蛋白7(EGFL7)重组蛋白 Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)

IFNL3 Protein Human 重组人 IFNL3 / IL28B / Interleukin-28B 蛋白

IL10RB重组小鼠 IL10RB / IL10R2 蛋白 Protein

IL6ST Protein Rat 重组大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白 (His & Fc 标签)

MSLN重组人 MSLN / Mesothelin 蛋白 Protein

豚鼠组胺(HIS)ELISA pcr检测试剂盒

Human gasic mucin (GM) ELISA Kit 人胃粘液素(GM)试剂盒

Humaotalprostatespecificaigen,tPSAELISAKit 人总前列腺特异抗原(tPSA)pcr检测试剂盒分装

HumanCreatineKinase,CK试剂盒人肌酸激酶(CK)试剂盒规格

：96T/48T

组织DNA损伤彗星荧光试剂盒20次

Humanprostatespecificaigen,PSAELISAKit人前列腺特异性抗原(PSA)试剂盒规格：96T/48T

猪主动脉平滑肌细胞大鼠内凝集蛋白1(ITLN1)试剂盒 ，英文名： ITLN1 ELISA Kit

Monkey soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 猴可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)试剂盒

RatGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISAKit 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)pcr检测试剂盒分装

CLIAKitforGHRP-Ghrelin(Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin)ELISAKit小鼠生长激素释放肽ghrelin

细胞含量比色法定量试剂盒20次

RatSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit大鼠S100B蛋白(S-100B)试剂盒规格：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流


。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。