老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

猪骨骼肌卫星分离自四肢肌肉组织
；骨骼肌又称横纹肌
，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附
。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态

、结构和功能的器官
，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张
，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名
。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状
，不分支，有明显横纹
，核很多
，且都位于细胞膜下方
。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维
。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）
。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线
。H线的中部有一M线

。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。肌卫星细胞指骨骼肌中除骨骼肌纤维（肌细胞）外的一种扁平、有突起的细胞
。着于肌纤维（肌细胞）表面；当肌纤维（肌细胞）受损后，肌卫星细胞可增殖分化，参与肌纤维（肌细胞）的修复
，因此具有干细胞性质
。

方法简介：

实验室分离的猪骨骼肌卫星采用-胶原酶混合消化法结合多次差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的猪骨骼肌卫星经Desmin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含FBS、马血清、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态
：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

猪骨骼肌卫星体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞

，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠6酮前列腺素(6-K-PG)检测试剂盒 ，英文名： 6-K-PG ELISA Kit

Mouse maix metalloproteinase 3 (MMP-3) ELISA Kit 小鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)检测试剂盒

MouseHomocysteicacid,HcyELISAKit 小鼠同型半胱(Hcy)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanschistosomaELISAKit人血吸虫

通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒10/20次

ELISAKitTAT大鼠抗复合物

HA重组甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22) 海葵神经毒素(35肽)

S100A11重组人 S100A11 / S100C 蛋白 Protein

EDNRB Protein Human 重组人 EDNRB / Endothelin B Receptor 蛋白 (Fc 标签)

KLK13 Protein Human 重组人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Arg22) 海葵神经毒素(35肽)

EDNRB Protein Human 重组人 EDNRB / Endothelin B Receptor 蛋白 (Fc 标签)

HA重组甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

KLK13 Protein Human 重组人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白

S100A11重组人 S100A11 / S100C 蛋白 Protein

小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human milk ansferrin / lactoferrin (LF/LTF) ELISA Kit 人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)检测试剂盒

Humahioredoxin,xELISAKit 人硫氧化还原蛋白(x)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-Bactericidalpermeabilityincreasingproteinaibody,BPI-Ab检测试剂盒人抗杀菌通透性蛋白抗体(BPI-Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

植物过氧化氢酶(CATALASE)催化活性比色法定量检测试剂盒20次

Humanα-Smoothmuscleactin,α-SMAELISAKit人α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)检测试剂盒规格

：96T/48T

猪骨骼肌卫星细胞小鼠多巴胺(mouse Dopamine)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠氧化酶(mouse DAO)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠D-二聚体(mouse D-Dimer)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

小鼠二肽基肽酶Ⅳ(mouse DPP4)   作用：   ELISA   规格

：      进口分装