實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠子宮內膜上皮分離自子宮組織 ；子宮是孕育胎兒的器官 ，位於盆腔中部 ，膀胱與直腸之間 ，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化 。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶 、盆膈 、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持 ，這些結構受損或鬆弛時 ，可以引起子宮脫垂 。子宮內膜即黏膜 ，由上皮（屬單層柱狀上皮 ，有分泌細胞和纖毛細胞二種）和固有膜（由結締組織構成 ，其內有大量的星形細胞 ，稱為基質細胞）組成 ，子宮內膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層 ，功能層較厚 ，約占內膜厚度的4/5 ；基底層較薄較致密 ，約占1/5，功能層可剝脫 ，而基底層剝脫 。子宮內膜上皮細胞主要功能 ：①子宮內膜亦稱子宮黏膜 ，是指構成哺乳類子宮內壁的一層 ；②子宮內膜對動情素和孕激素都起反應 ，因此可隨著性周期（發情周期 、月經周期）發生顯著的變化 。子宮內膜與胚胎附植密切相關 ，在生殖生理的研究中占重要地位 。在胚胎與母體“對話"的過程中 ，子宮內膜上皮細胞充當了極其重要的角色 。子宮內膜構成雌性哺乳動物子宮壁的內層 ，位於子宮腔麵 ，在動物生殖生理活動中占有重要地位 。子宮和子宮內膜是維持雌性動物生理功能和生育能力的重要器官 ，子宮內膜的再生修複是子宮的重要生理功能 。體外培養的子宮內膜上皮細胞對於研究其生理功能 、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠子宮內膜上皮采用膠原酶消化法 ，結合上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠子宮內膜上皮經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

細胞凋亡-Hoechst染色試劑盒   100次

HoechstStainingKit

Kisser封片液   10ml

Kisser'sMouingMedium

小鼠凋亡信號調節激酶I(ASK-1)ELISA 試劑盒

Human myelin basic protein (MBP) ELISA Kit 人髓0脂堿性蛋白(MBP)試劑盒

HumancoagulationfactorⅫ,FⅫELISAKit 人Ⅻ(FⅫ)試劑盒 進口分裝

HumanArginase,Arg試劑盒人精酶(Arg)試劑盒

植物源性食品核桃(waln)試劑盒20次

Humahyroglobulin ，TGELISAKit人甲狀腺球蛋白(TG)試劑盒

CFD重組小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白 (His 標簽) Protein

5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin 0.5mg5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a) 5-羥色胺受體3抗原

EPHB4重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 標簽) Protein

FES Protein Human 重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽)

EFNB2 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 標簽)

抵抗素(RETN)重組蛋白 Recombinant Resistin (RETN)

FES Protein Human 重組人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 標簽)

EPO重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 標簽) Protein

EPHA4 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EphA4 蛋白 (His 標簽)

PMM2重組人 Phosphomannomutase 2 / PMM2 / CDG1 蛋白 (His 標簽) Protein

小鼠子宮內膜上皮細胞大鼠成纖維細胞生長因子2(FGF2/bFGF)試劑盒  ，英文名 ： FGF2/bFGF ELISA Kit

Mouse factor B (BF) ELISA Kit 小鼠B因子(BF)試劑盒

ELISA 小鼠補體C3a(mouse C3a)  進口分裝

CLIAKitforLepIgGISAKit大鼠鉤端IgG

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性試劑盒20次

ELISAKitα1-MGα1微球蛋白