老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介
：

小鼠子宫内膜上皮分离自子宫组织
；子宫是孕育胎儿的器官
，位于盆腔中部
，膀胱与直肠之间
，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈
、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂。子宫内膜即黏膜，由上皮（属单层柱状上皮，有分泌细胞和纤毛细胞二种）和固有膜（由结缔组织构成，其内有大量的星形细胞，称为基质细胞）组成

，子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层，功能层较厚，约占内膜厚度的4/5
；基底层较薄较致密，约占1/5，功能层可剥脱，而基底层剥脱
。子宫内膜上皮细胞主要功能：①子宫内膜亦称子宫黏膜
，是指构成哺乳类子宫内壁的一层

；②子宫内膜对动情素和孕激素都起反应
，因此可随着性周期（发情周期、月经周期）发生显著的变化
。子宫内膜与胚胎附植密切相关，在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎与母体“对话"的过程中
，子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的内层，位于子宫腔面
，在动物生殖生理活动中占有重要地位。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官，子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能

。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义

。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠子宫内膜上皮采用胶原酶消化法
，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠子宫内膜上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体

、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒   100次

HoechstStainingKit

Kisser封片液   10ml

Kisser'sMouingMedium

小鼠凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA 试剂盒

Human myelin basic protein (MBP) ELISA Kit 人髓0脂碱性蛋白(MBP)试剂盒

HumancoagulationfactorⅫ,FⅫELISAKit 人Ⅻ(FⅫ)试剂盒 进口分装

HumanArginase,Arg试剂盒人精酶(Arg)试剂盒

植物源性食品核桃(waln)试剂盒20次

Humahyroglobulin，TGELISAKit人甲状腺球蛋白(TG)试剂盒

CFD重组小鼠 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白 (His 标签) Protein

5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin 0.5mg5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a) 5-羟色胺受体3抗原

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 (aa 563-987, His & GST 标签) Protein

FES Protein Human 重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签)

EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)

抵抗素(RETN)重组蛋白 Recombinant Resistin (RETN)

FES Protein Human 重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签)

EPO重组小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 标签) Protein

EPHA4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 EphA4 蛋白 (His 标签)

PMM2重组人 Phosphomannomutase 2 / PMM2 / CDG1 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠子宫内膜上皮细胞大鼠成纤维细胞生长因子2(FGF2/bFGF)试剂盒 ，英文名： FGF2/bFGF ELISA Kit

Mouse factor B (BF) ELISA Kit 小鼠B因子(BF)试剂盒

ELISA 小鼠补体C3a(mouse C3a)  进口分装

CLIAKitforLepIgGISAKit大鼠钩端IgG

通用型HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性试剂盒20次

ELISAKitα1-MGα1微球蛋白