老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠真皮微血管内皮分离自真皮组织
；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维
，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质
。微血管内皮细胞（MEC）在炎症反应
、肿瘤生长、创面愈合过程中起着非常重要的作用。在创面愈合研究领域
，由于表皮细胞

、真皮成纤维细胞体外培养技术的成熟，人们对这两种细胞早已进行了大量深入的研究。与之相比

，对参与创面愈合过程的另一种主要细胞——真皮微血管内皮细胞

，则因其体外分离培养技术的困难而使相关的研究受限。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠真皮微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法
、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠真皮微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息
：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠胃泌素(GT)检测试剂盒 ，英文名
： GT ELISA Kit

Mouse aquaporin 2 (AQP-2) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白2(AQP-2)检测试剂盒

MouselymphocytefactorELISAKit 小鼠淋巴细胞因子检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSF1ELISAKit大鼠热休克因子1

细胞NADPH氧化酶活性化学发光法定量检测试剂盒20次(10样本)

ELISAKitGABA大鼠γ氨基

MCAM重组小鼠 CD146 / MCAM 蛋白 Protein

β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(βACE1)重组蛋白 Recombinant Beta-Site APP Cleaving Enzyme 1 (bACE1)

BPHL重组人 BPHL 蛋白 Protein

GRK6 Protein Human 重组人 GRK6 / GPRK6 蛋白 (His & GST 标签)

NRP1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 (Fc 标签)

肝细胞癌相关蛋白1(HCRP1)重组蛋白 Recombinant Hepatocellular Carcinoma Related Protein 1 (HCRP1)

GRK6 Protein Human 重组人 GRK6 / GPRK6 蛋白 (His & GST 标签)

PTPRC重组小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (Fc 标签) Protein

SFTPD Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 SFTPD / SP-D / SFTP4 蛋白

BTC重组人 BTC / Betacellulin 蛋白 Protein

小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human vitamin D (VD) ELISA Kit 人(VD)检测试剂盒

Humanai-spermaibody,AsAbELISAKit 人抗抗体(AsAb)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanChlamydiaachomatis,CT检测试剂盒人沙眼衣原体(CT)检测试剂盒规格：96T/48T

转基因玉米T25品系试剂盒20次

Humansecretoryleukocyteproteaseinhibitor,SLPIELISAKit人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠真皮微血管内皮细胞兔脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(rabbit A-FABP)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

兔血管紧张素II(rabbit Angiotensin-2)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔骨成型蛋白-2(rabbit BMP-2)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

兔骨碱性0酸酶(rabbit BALP)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。