細胞簡介 ：

小鼠牙齦上皮分離自牙齦組織 ；牙齦是附著在牙頸和牙槽突部分的粘膜組織 ，呈粉紅色 、有光澤 、質堅韌。牙齦邊緣稱為齦緣 ，正常呈月芽形 。齦緣與牙頸之間的小溝稱齦溝 。兩鄰牙之間的牙齦突起稱齦乳突 。也叫齒齦 ，通稱牙床 ；是指包住齒頸的黏膜組織 ，粉紅色 ，內有很多血管和神經 。牙齦上皮長期被認為是抵禦口腔中持續存在的細菌的被動免疫屏障 ，隨著對牙周致病菌的不斷認識 ，發現牙齦上皮不僅僅是抵禦微生物的物理屏障 ，上皮細胞還可以分泌抗菌多肽 ，參與先天性免疫 。牙齦上皮作為牙周組織的道屏障 ，在抵禦牙周炎細菌入侵的過程中發揮了重要作用 ，建立正常牙齦上皮細胞體外培養體係 ，將為各種牙齦上皮相關的研究提供穩定的實驗模型 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠牙齦上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠牙齦上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)檢測試劑盒  ，英文名 ： Col Ⅰ ELISA Kit

Mouse myoglobin (MYO/MB) ELISA Kit 小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)檢測試劑盒

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit 小鼠糖原合成酶激酶(GSK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人類似RIKENcDNA3110050K21基因

通用型魚濾過性毒菌敗血症(ViralHaemorrhagicSepticaemia)試劑盒20次

ELISAKitFⅩⅢ大鼠ⅩⅢ

CD79B重組小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

35kDa核孔蛋白(NUP35)重組蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

EPHA2重組人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 標簽) Protein

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

LCN2 Protein Rat 重組大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

35kDa核孔蛋白(NUP35)重組蛋白 Recombinant Nucleoporin 35kDa (NUP35)

DSC2 Protein Human 重組人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白

CD79B重組小鼠 CD79B / B29 蛋白 Protein

LCN2 Protein Rat 重組大鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

EPHA2重組人 EphA2 蛋白 (aa 585-976, His & GST 標簽) Protein

小鼠抗卵巢抗體(AOAb)ELISA 試劑盒  試劑盒 組裝/原裝

Ai thyroid globulin aibody against rat (ATGA/TGAB) ELISA Kit 大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)檢測試劑盒

Humanepidermalkeratin,EKELISAKit 人表皮角蛋白(EK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAngiopoietin4,ANG-4檢測試劑盒人血管生成素4(ANG-4)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物輔酶Q含量比色法定量檢測試劑盒20次

IL-1βELISAKit魚類白介素1β(IL-1β)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠牙齦上皮細胞小鼠骨成型蛋白-2   英文名稱 ：   Bone morphogenetic protein-2   規格 ：      英文縮寫 ：   BMP-2

小鼠骨成型蛋白-4   英文名稱 ：   Bone morphogenetic protein-4   規格 ：      英文縮寫 ：   BMP-4

小鼠骨成型蛋白受體1A   英文名稱 ：   Bone morphogenetic protein-Receptor 1A   規格 ：      英文縮寫 ：   BMP-R1A

小鼠免疫細胞表麵抗原分子CD4+   英文名稱 ：   Mouse Cluster of Differeiation 4+   規格 ：      英文縮寫 ：   CD4+

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。