細胞簡介 ：

小鼠小梁網分離自眼球組織 ；小梁網由角膜基質纖維 、後界膜和角膜內皮向後擴展而成 ，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內側 。小梁網細胞在眼內壓調節中起著關鍵作用 ；小梁網細胞內有特定的神經遞質和神經肽受體，其中包括腎上腺素 、乙酰和神經肽Y 。青光眼是由於眼內壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病 ，小梁網細胞的體外培養是青光眼病因學研究的重要手段之一 。在小梁網細胞中 ，一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發細胞內信號傳導機製 ，小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬蛋白酶 。形態學觀察可見 ，剛從組織塊長出的原代細胞 ，形態各異 ，多數呈星狀或不規則形 。細胞有胞突 ，核橢圓形 ，胞體肥大 ，胞漿豐富 ，且可見吞噬顆粒 。隨著細胞的增生及相互融合為單層 ，細胞的形態趨於一致 。胞漿的色素顆粒及胞突消失 ，排列緊密呈類似上皮細胞的扁橢圓形或不規則形 。胞體透亮 ，包膜清晰 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠小梁網采用組織貼塊法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠小梁網經NSE（神經元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠/離子轉運ATP酶α1肽(ATP1α1)檢測試劑盒  ，英文名 ： ATP1α1 ELISA Kit

Mouse niic oxide syhase (NOS) ELISA Kit 小鼠合成酶(NOS)檢測試劑盒

RatComplemefragme3a,C3aELISAKit 大鼠補體片斷3a(C3a)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforP(HumanGrowthHormoneBindingProtein)ELISAKit人生長激素結合蛋白

細胞鈣離子濃度比色法定量檢測試劑盒20次

RatsolubleIerleukin2recepter,IL-2sRELISAKit大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

EPHB4重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 標簽) Protein

熱休克蛋白40(HSP40)重組蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

EVI2A重組人 EVI2A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

DMBT1 Protein Human 重組人 DMBT1 / Muclin 蛋白

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

熱休克蛋白40(HSP40)重組蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 40 (HSP40)

DMBT1 Protein Human 重組人 DMBT1 / Muclin 蛋白

EPHB4重組人 EphB4 / HTK 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

EVI2A重組人 EVI2A 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠抗子宮內膜抗體(EMAb)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human sphingomyelin (SM) ELISA Kit 人鞘0脂(SM)檢測試劑盒

Humanmyelinprotein2,p2ELISAKit 人神經髓鞘蛋白(p2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalpha-granularmembraneprotein,GMP-140檢測試劑盒人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50次

MonkeyN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit猴Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠小梁網細胞小鼠核轉錄因子p65(mouse NF-kBp65)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠硝基酪酸(mouse Niotyrosine)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠神經肽Y(mouse NPY)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠神經生長因子(mouse NGF)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。