老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠胃平滑肌分离自胃组织
；胃柔软，活体呈橘红色。胃空虚时形成许多皱襞，充盈时变平坦
。胃壁由粘膜
、粘膜下膜
、肌膜和浆膜四层构成
。粘膜上皮为柱状上皮
。上皮向粘膜深部下陷构成大量腺体（胃底腺、贲门腺
、幽门腺）
，它们的分泌物混合形成胃液
，对食物进行化学性消化
。粘膜在幽门处由于覆盖幽门括约肌的表面而形成环状的皱襞叫幽门瓣。胃肌膜由三层平滑肌构成
，外层纵形
，中层环形
，内层斜行
，其中环形肌发达


，在幽门处特别增厚形成幽门括约肌。胃平滑肌细胞源自胃的平滑肌层，细胞通过紧密连接，进行同步性运动，完成肌肉的舒缩活动，以推动食物前进，完成对食物的机械性消化，并促进化学性消化和吸收。胃平滑肌具有肌组织的共同特性，如兴奋、自律性、传导性和收缩性，在离体后，置于适宜的环境内

，仍能进行良好的节律性运动
，但其收缩很缓慢，节律性远不如心肌规则
。胃平滑肌对电刺激较不敏感，但对于牵张、温度和化学刺激则特别敏感
，轻微的刺激常可引起强烈的收缩。胃平滑肌的这一特性是与它所处的生理环境分不开的，胃内容物对平滑肌的牵张
、温度和化学刺激是引起内容物推进或排空的自然刺激因素。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠胃平滑肌采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠胃平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化

；

4

、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠胰岛素(INS)试剂盒   96T/48T

小鼠原激活肽(TAP)试剂盒   96T/48T

小鼠(ypsin)试剂盒   96T/48T

小鼠合成酶(NOS)试剂盒   96T/48T

小鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat complexed prostate specific aigen (CPSA) ELISA Kit 大鼠复合前列腺特异性抗原(CPSA)试剂盒

Humanparaoxonase,PONELISAKit 人酶(PON)试剂盒 96T/48T 进口分装

Aflatoxin,AFT试剂盒霉毒素(AFT)试剂盒规格：96T/48T

油脂DNA萃取试剂盒10次

MouseIerferonα,IFN-αELISAKit小鼠α干扰素(IFN-α)试剂盒规格：96T/48T

SDC1重组小鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 蛋白 Protein

Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原 0.5mgAkt/PKB 蛋白激酶B(抗原)

IL17A重组人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

CD40LG Protein Human 重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)

KIT Protein Rat 重组大鼠 KIT / c-KIT 蛋白 (Fc 标签)

Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原 0.5mgAkt/PKB 蛋白激酶B(抗原)

CD40LG Protein Human 重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)

SDC1重组小鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 蛋白 Protein

KIT Protein Rat 重组大鼠 KIT / c-KIT 蛋白 (Fc 标签)

IL17A重组人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

小鼠胃平滑肌细胞大鼠低密度脂蛋白(LDL-C)试剂盒

，英文名： LDL-C ELISA Kit

Porcine angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒

菌核酸试剂盒(荧光PCR法) 48T

CLIAKitforLR/Ob-RELISAKit大鼠苗条素受体

通用抗体稀释溶液10/100毫升

ELISAKitAmAC-1鸡巨噬细胞替代激活相关化学因子1

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。