實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠外周血白分離自外周血 ；外周血是除骨髓之外的血液 ，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血幹細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血幹細胞 ，老哥俱樂部把這樣得到的幹細胞稱為外周血幹細胞 ，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念 。白細胞（Leukocyte） ，舊稱白血球 ，血液中的一類細胞 。根據白細胞的細胞質內有無特殊顆粒 ，可將其分為有粒白細胞和無粒白細胞 。前者常簡稱為粒細胞 ，根據其特殊顆粒的染色特性 ，又分為中性粒細胞 、嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞 ，白細胞也通常被稱為免疫細胞 。在顯微鏡下可以看到 ，血細胞中體積比較大 、數量比較少 ，具有細胞核 ；其主要作用是吞噬細菌 、防禦疾病 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠外周血白采用取外周血 、通過密度梯度離心法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠外周血白經過檢測 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖 ；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

血管內皮生長因子 D(VEGF-D)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

血管內皮生長因子 165(VEGF165)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

血管內皮生長因子受體 1(VEGF-R1)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

血管內皮生長因子受體 2(VEGF-R2)   作用：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠幽門螺杆菌抗體IgG(HP-IgG)試劑盒 96T/48T

Human granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 人顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒

HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9ELISAKit 人糖鏈抗原19-9(CA19-9)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-K-PG(Mouse6-keto-prostaglandin)ELISAKit小鼠6同前列腺素

引物設計合成和酶切位點分析1個基因

Mousemelanocyteaibody,MCAbELISAKit小鼠黑色素細胞抗體(MCAb)試劑盒規格 ：96T/48T

HA重組甲型流感 H4N6 (A/Swine/Ontario/01911-1/99) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

rhEGF(rh-Epidermal growth factor 100ugrhEGF(rh-Epidermal growth factor)

CTHRC1重組人 CTHRC1 蛋白 Protein

CCL3 Protein Human 重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白

HSPB1 Protein Human 重組人 HSP27 / HSPB1 蛋白

rhEGF(rh-Epidermal growth factor 100ugrhEGF(rh-Epidermal growth factor)

CCL3 Protein Human 重組人 CCL3 / Mip1a 蛋白

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CTHRC1重組人 CTHRC1 蛋白 Protein

小鼠外周血白細胞大鼠凋亡相關因子(FAS)試劑盒  ，英文名 ： FAS ELISA Kit

Porcine myeloperoxidase (MPO) ELISA Kit 豬髓過氧化物酶(MPO)試劑盒

玉米特定基因序列(IVR)核酸試劑盒 48T

CLIAKitforLTA(Humanlipoteichoicacids)ELISAKit人脂0壁酸

鐵成分比色法定量試劑盒20次

ELISAKitIgA雞免疫球蛋白A