老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠输尿管上皮分离自输尿管组织
；输尿管上接肾盂
，下连膀胱
，是一对细长的管道
，呈扁圆柱状，位于腹膜后，为一肌肉粘膜所组成管状结构，沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆。输尿管有三个狭窄部：一个在肾盂与输尿管移行处（输尿管起始处）
；一个在越过小骨盆入口处；后一个在进入膀胱壁的内部
。这些狭窄是结石
、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构，即瓦耳代尔鞘，它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管。临床上将输尿管分为上
、中、下三段，也可称为腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自肾盂输尿管交界处，到跨越髂动脉处
；盆段，自髂动脉到膀胱壁
；膀胱段
，自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜、输尿管开口
。输尿管管壁分为4层，黏膜层、固有层、肌层、外膜。黏膜层表面为移行上皮，约有4-5层细胞；固有层由细密的结缔组织构成
，内含胶原纤维和少量弹性纤维；输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成
；外膜为疏松结缔组织

，营养血管由外膜进入输尿管
。其中，输尿管上皮细胞主要分布于黏膜层。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠输尿管上皮采用先消化、然后机械分离法使输尿管分层
、后胶原酶消化，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠输尿管上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

血管内皮生长因子受体 1(VEGF-R3)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

sVE-Cadherin   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

小鼠 ACTH(mouse ACTH)   作用：   ELISA   规格
：   96T   美国 Phoenix

mouse Activin A   作用：   ELISA   规格：   96T

小鼠游离睾酮(F-TESTO)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human Coxsackie virus IgM (Cox V-IgM) ELISA Kit 人柯萨奇病毒IgM(Cox V-IgM)试剂盒

HumanHirudinELISAKit 人水蛭素(Hirudin)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-epi-PGF2Alpha(Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha)ELISAKit兔8-异构前列腺素

银染法细胞端粒酶活性AP电泳分析试剂盒10次

MouseMethemoglobin,MHBELISAKit小鼠高铁血红蛋白(MHB)试剂盒规格：96T/48T

GFRA1重组狗 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 Protein

NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C 0.5mgNR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C) 谷受体2C(多肽)

CA3重组人 Carbonic Anhydrase III / CA3 蛋白 Protein

CCL27 Protein Human 重组人 CCL27 / CTACK 蛋白

GLIPR1 Protein Mouse 重组小鼠 GLIPR1 / RTVP1 蛋白

NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C 0.5mgNR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C) 谷受体2C(多肽)

CCL27 Protein Human 重组人 CCL27 / CTACK 蛋白

GFRA1重组狗 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 Protein

GLIPR1 Protein Mouse 重组小鼠 GLIPR1 / RTVP1 蛋白

CA3重组人 Carbonic Anhydrase III / CA3 蛋白 Protein

小鼠输尿管上皮细胞大鼠凋亡诱导因子(AIF)试剂盒 ，英文名： AIF ELISA Kit

Porcine orexin / orexin B (OX-B) ELISA Kit 猪食欲素/阿立新B(OX-B)试剂盒

大豆特定基因序列(Lectin)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforLTB(HumanlymphotoxinBeta)ELISAKit人淋巴毒素β

体液组织蛋白酶L(CATHEPSINL)活性荧光定量试剂盒20次

ELISAKitHSP-20鸡热休克蛋白20

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞

，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。