實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

小鼠腎小球上皮分離自腎組織 ；腎髒是機體的重要器官 ，它的基本功能是生成尿液 ，借以清除體內代謝產物及某些廢物 、毒物 ，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質 ，如葡萄糖 、蛋白質 、氨基酸 、鈉離子 、鉀離子 、等 ，以調節水 、電解質平衡及維護酸堿平衡 。腎髒同時還有內分泌功能 ，生成腎素 、促紅細胞生成素 、活性3 、前列腺素 、激肽等 ，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官 。腎髒的這些功能 ，保證了機體內環境的穩定 ，使新陳代謝得以正常進行 。腎小球是腎元中的用於將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢 ，被鮑氏囊所包裹 ，是尿液形成的重要構造 。血液經由入球小動脈進入腎小球 。腎小球上皮細胞是由間充質細胞分化發育 、襯貼於腎小球血管腔的單層扁平上皮細胞 ，是腎小球的固有細胞之一 ，也是構成腎小球濾過膜的重要組成部分。腎小球上皮細胞的正常結構和功能是腎單位濾過及腎小球微環境穩定的重要保障 。腎小球濾過膜的外層為上皮細胞層 ，厚約40nm ，腎小球上皮細胞是腎小囊的髒層上皮細胞 ，貼附於腎小球血管外側基底膜上。上皮細胞又稱足細胞 ，足細胞的不規則突起為足突 ，其間有許多狹小間隙 ，血液經濾過膜過濾入腎小球囊 。腎小球上皮細胞可通過合成和分泌腎上腺髓質肽抑製係膜細胞增殖 ，腎上腺髓質肽作為一種重要的旁分泌因子 ，可保持腎小球微環境穩定 ，並參與腎小球的炎症過程 。體外培養的腎小球上皮細胞對各型腎小球腎炎具有重要的研究價值 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠腎小球上皮采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠腎小球上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠生長分化因子1(GDF1)檢測試劑盒  ，英文名 ： GDF1 ELISA Kit

Mouse pepsin (Pepsin) ELISA Kit 小鼠(Pepsin)檢測試劑盒

RatVitaminE,VEELISAKit 大鼠(VE)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHCBII(HumanCollagen-likeBioproteinII)ELISAKit人膠原蛋白Ⅱ

細胞WNV(WESTNILE)病毒定性檢測試劑盒20次

UlexEuropaeusagglinin,UEAELISAKit荊豆凝集素(UEA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CD8A重組雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 蛋白 Protein

p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142 0.5mgp- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 0酸化β-連環蛋白抗原

DOT1L重組人 DOT1L / KMT4 蛋白 Protein

DCBLD2 Protein Human 重組人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 蛋白

ANGPT2 Protein Mouse 重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白

p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142 0.5mgp- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 0酸化β-連環蛋白抗原

DCBLD2 Protein Human 重組人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 蛋白

CD8A重組雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 蛋白 Protein

ANGPT2 Protein Mouse 重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白

DOT1L重組人 DOT1L / KMT4 蛋白 Protein

小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ciliary neuroophic factor (CF) ELISA Kit 大鼠睫狀神經營養因子(CF)檢測試劑盒

Humanneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISAKit 人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanadrenalcoexaibody,ACA檢測試劑盒人腎上腺皮質抗體(ACA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物DNA甲基轉移酶(MET)總活性酶連續循環比色法定量檢測試劑盒20次

mouseadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit小鼠促腎上腺皮質激素(ACTH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠腎小球上皮細胞小鼠基質細胞衍生因子-1α   英文名稱 ：   somal-derived factor-1 a   規格 ：      英文縮寫 ：   SDF-1α

小鼠基質細胞衍生因子-1R   英文名稱 ：   somal-derived factor-1 R   規格 ：      英文縮寫 ：   SDF-1R

小鼠可溶性E-選擇素   英文名稱 ：   soluble E-Selectin   規格 ：      英文縮寫：   sE-Selectin/sCD62E

小鼠可溶性L-選擇素   英文名稱 ：   soluble L-Selectin   規格：      英文縮寫 ：   sL-Selectin/sCD62L