老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗

， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

小鼠肾小球上皮分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官
，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡
。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素
、促红细胞生成素、活性3
、前列腺素、激肽等
，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官
。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行

。肾小球是肾元中的用于将血液过滤生成原尿的一团毛细血丛，被鲍氏囊所包裹，是尿液形成的重要构造。血液经由入球小动脉进入肾小球

。肾小球上皮细胞是由间充质细胞分化发育
、衬贴于肾小球血管腔的单层扁平上皮细胞，是肾小球的固有细胞之一，也是构成肾小球滤过膜的重要组成部分
。肾小球上皮细胞的正常结构和功能是肾单位滤过及肾小球微环境稳定的重要保障。肾小球滤过膜的外层为上皮细胞层，厚约40nm，肾小球上皮细胞是肾小囊的脏层上皮细胞
，贴附于肾小球血管外侧基底膜上。上皮细胞又称足细胞，足细胞的不规则突起为足突
，其间有许多狭小间隙，血液经滤过膜过滤入肾小球囊。肾小球上皮细胞可通过合成和分泌肾上腺髓质肽抑制系膜细胞增殖
，肾上腺髓质肽作为一种重要的旁分泌因子
，可保持肾小球微环境稳定
，并参与肾小球的炎症过程。体外培养的肾小球上皮细胞对各型肾小球肾炎具有重要的研究价值。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠肾小球上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肾小球上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠生长分化因子1(GDF1)检测试剂盒

，英文名
： GDF1 ELISA Kit

Mouse pepsin (Pepsin) ELISA Kit 小鼠(Pepsin)检测试剂盒

RatVitaminE,VEELISAKit 大鼠(VE)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHCBII(HumanCollagen-likeBioproteinII)ELISAKit人胶原蛋白Ⅱ

细胞WNV(WESTNILE)病毒定性检测试剂盒20次

UlexEuropaeusagglinin,UEAELISAKit荆豆凝集素(UEA)检测试剂盒规格：96T/48T

CD8A重组雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 蛋白 Protein

p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142 0.5mgp- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 0酸化β-连环蛋白抗原

DOT1L重组人 DOT1L / KMT4 蛋白 Protein

DCBLD2 Protein Human 重组人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 蛋白

ANGPT2 Protein Mouse 重组小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白

p- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142 0.5mgp- Beta catenin(p-beta Catenin(phosphor-Y142)) 0酸化β-连环蛋白抗原

DCBLD2 Protein Human 重组人 DCBLD2 / ESDN / CLCP1 蛋白

CD8A重组雪貂 CD8A / CD8 alpha chain 蛋白 Protein

ANGPT2 Protein Mouse 重组小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白

DOT1L重组人 DOT1L / KMT4 蛋白 Protein

小鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ciliary neuroophic factor (CF) ELISA Kit 大鼠睫状神经营养因子(CF)检测试剂盒

Humanneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISAKit 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanadrenalcoexaibody,ACA检测试剂盒人肾上腺皮质抗体(ACA)检测试剂盒规格：96T/48T

植物DNA甲基转移酶(MET)总活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20次

mouseadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit小鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠肾小球上皮细胞小鼠基质细胞衍生因子-1α   英文名称
：   somal-derived factor-1 a   规格：      英文缩写
：   SDF-1α

小鼠基质细胞衍生因子-1R   英文名称
：   somal-derived factor-1 R   规格：      英文缩写：   SDF-1R

小鼠可溶性E-选择素   英文名称
：   soluble E-Selectin   规格：      英文缩写
：   sE-Selectin/sCD62E

小鼠可溶性L-选择素   英文名称：   soluble L-Selectin   规格
：      英文缩写
：   sL-Selectin/sCD62L