老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠肾上腺皮质分离自肾上腺组织
；肾上腺是人体相当重要的内分泌器官
，由于位于两侧肾脏的上方，故名肾上腺

。肾上腺左右各一
，位于肾的上方
，共同为肾筋膜和脂肪组织所包裹
。左肾上腺呈半月形，右肾上腺为三角形。从侧面观察，腺体分肾上腺皮质和肾上腺髓质两部分，周围部分是皮质
，内部是髓质。肾上腺内部是髓质部分，分泌肾上腺素和。这些激素在应激状态释放增多
，能够帮助升高血压

，加快心率，升高血糖，动员全身的储备物质，为机体与外界环境的抗争作好充分准备。肾上腺外部是皮质部分
，分泌醛固酮
、和少量的雌雄激素。醛固酮能够促进小便中尿钾的排出和尿钠的重吸收
，正常数量的醛固酮，对维持人体正常血压有重要作用。但是如果过多分泌，会导致高血压和低血钾。是人体必需的激素之一
。当人体处于应激状态时，比如感冒，发烧，遇到突发事件的时候

，肾上腺皮质分泌大量的，这些能够动员机体的存储能源，为应对内部或者外部重要事件提供充分的物质准备。当缺乏时，机体在遇到重大事件的时候，往往缺乏足够应对能力，容易被病毒或外界压力所击倒。肾上腺产生的雄激素
，对男性来讲，并非，但是对女性而言，是雄激素的一个重要来源。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠肾上腺皮质采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肾上腺皮质经3β-HSD免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上

，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形

、多角形

传代特性 可传1-2代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

小鼠抑制素B(INH-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促甲状腺素释放激素(H)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠促上皮质激素释放激素(CRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血清总补体(CH50)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受体(D2R)试剂盒

Humanβmannosidase,βManaseELISAKit 人β甘露糖苷酶(βManase)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor(CTX-I)ELISAKit大鼠Ⅰ型胶原C端肽

荧光或共聚焦显微镜制片封片处理液(荧光稳定、保存)5/20毫升

MouseIerleukin18,IL-18ELISAKit小鼠白介素18(IL-18)试剂盒规格：96T/48T

CD38重组大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生长因子受体3(抗原)

RSPO3重组人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 标签) Protein

CD38 Protein Human 重组人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 标签)

CES2 Protein Mouse 重组小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

ErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3 0.5mgErbB-3/HER3(Epidermal growth factor receptor3) 表皮生长因子受体3(抗原)

CD38 Protein Human 重组人 SCARB3 蛋白 (His & FLAG 标签)

CD38重组大鼠 SCARB3 蛋白 Protein

CES2 Protein Mouse 重组小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

RSPO3重组人 RSPO3 / R-spondin 3 蛋白 (aa 1-146, His 标签) Protein

小鼠肾上腺皮质细胞大鼠法尼醇X受体(FXR)试剂盒 ，英文名： FXR ELISA Kit

Porcine endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 猪内皮素1(ET-1)试剂盒

鸭特定基因序列(Duck)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforM-AChRELISAKit大鼠受体

体液游离氨基酸含量荧光定量试剂盒20次

ELISAKitTGF-β1鸡转化生长因子β1