老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠破骨分离自骨组织和骨髓
；破骨细胞是骨组织中的多核巨细胞
，位于骨组织表面的浅凹处
。目前一般认为破骨细胞是分离自骨骼外的造血系统，其前体可能属于造血干细胞的前单核细胞

。破骨细胞的主要功能是维持骨吸收和骨形成的相对平衡，若失去这种平衡则发生病理性变化
。因此多数学者从破骨细胞着手研究破骨细胞的结构、功能探讨骨吸收，形成相互平衡的机制。但破骨细胞是一种终末分化细胞
，属于不增殖细胞群
，不能增殖和传代
，只能进行原代培养且存活时间较短。

方法简介

：

公司实验室分离的小鼠破骨采用机械分离法/密度梯度离心法和骨髓单核细胞诱导法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠破骨经TRAP染色检测

，纯度可达30%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体

、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 多核巨细胞

传代特性 属于终末分化细胞
；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气

，95%；CO2

，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象

，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意

： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

血清游离（FC）含量测定试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

乙酰酯酶（AchE）试剂盒   可见分光光度法   50管/48样

组织及血液酸性0酸酶（ACP）试剂盒   可见分光光度法   50管/24样

组织及血液碱性0酸酶（AKP/ALP）试剂盒   可见分光光度法   50管/24样

小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai scleroderma aibody 70 (SCL70/topo 1) ELISA Kit 人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)试剂盒

Humahymus-dependeaigen,TD-AgELISAKit 人依赖性抗原(TD-Ag)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAAA(HumanAi-adrenocoicalaibody)ELISAKit人抗肾上腺皮质抗体

胰岛素细胞脂肪诱导生成比色法定量试剂盒20次

MouseNeuroglobin,NGBELISAKit小鼠脑红蛋白(NGB)试剂盒

NTRK1重组大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 标签) Protein

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受体(抗原)

CTNNB1重组人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 标签)

CD36 Protein Mouse 重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

DR3/TRAMP (death receptor-3 0.5mgDR3/TRAMP (death receptor-3) DR3 死亡受体(抗原)

CCL15 Protein Human 重组人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 标签)

NTRK1重组大鼠 TrkA / NTRK1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CD36 Protein Mouse 重组小鼠 CD36 / SCARB3 蛋白

CTNNB1重组人 beta-Catenin / CTNNB1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠破骨细胞大鼠钙激活1(CAPN1)试剂盒 ，英文名： CAPN1 ELISA Kit

Porcine telomerase (TE) ELISA Kit 猪端粒酶(TE)试剂盒

转基因植物TE基因核酸试剂盒 48T

CLIAKitforMCAb(Mousemelanocyteaibody)ELISAKit小鼠黑色素细胞抗体

体液血管紧张素Ⅰ转化酶1(ACE1)活性荧光共振能量转移法(FRET)定量试剂盒20次

ELISAKitIgE马免疫球蛋白E