實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介：

小鼠皮層神經元分離自腦皮層組織 ；皮層神經元細胞是構成中樞神經係統結構和功能的基本單位 。神經元是具有長突觸(軸突)的細胞 ，它由細胞體和細胞突起構成 。在長的軸突上套有一層鞘 ，組成神經纖維 ，它的末端的細小分支叫做神經末梢 。細胞體位於腦 、脊髓和神經節中 ，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中 。細胞體是細胞含核的部分 ，其形狀大小有很大差別 ，直徑約4-120微米 。核大而圓 ，位於細胞中央 ，染色質少 ，核仁明顯 。細胞質內有斑塊狀的核外染色質 ，還有許多神經元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分 ，又可分為樹突和軸突。每個神經元可以有一或多個樹突 ，可以接受刺激並將興奮傳入細胞體 。每個神經元隻有一個軸突 ，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經元或其他組織 ，如肌肉或腺體 。皮質神經元是大腦皮質的主要組成細胞之一 ，是大腦進行功能活動調節的基本單位 ，參與動物多種中樞神經係統疾病的病理過程。通過形態學觀察顯示神經元從貼壁 、伸出突起開始 ；突起逐漸增多 ，而後突起進一步增多並逐漸成網 ，同時細胞胞體增大 ，周邊光暈明顯 。10-12d細胞為豐滿 ，隨後神經元開始裂解 ，突起逐漸減少 ，細胞已退化變性 ，輪廓模糊 ，光暈消失 ，細胞變形 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的小鼠皮層神經元采用消化法 、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑製法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠皮層神經元經β-Tubulin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代 。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品 ：

大鼠內向整流型離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)檢測試劑盒  ，英文名 ： KCNJ5 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor AB (PDGF-AB) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)檢測試劑盒

Ratai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISAKit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGL3(HumanGlucoseanspoer3)ELISAKit人葡萄糖轉運蛋白3

細胞分泌型堿性0酸酶化學發光法定量檢測試劑盒20次

RatStemcellfactor/mastcellgrowthfactor,SCF/MGFELISAKit大鼠幹細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

CDH1重組大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

CTn1 (cardiac troponin 1 0.5mgCTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白

XRCC5 & XRCC6重組人 XRCC5 & XRCC6 Heterodimer 蛋白 Protein

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白

PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白

CTn1 (cardiac troponin 1 0.5mgCTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白

CDH1重組大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白

XRCC5 & XRCC6重組人 XRCC5 & XRCC6 Heterodimer 蛋白 Protein

小鼠瘤病毒16(HPV-16)檢測試劑盒 96T/48T

Human endothelial lipase (EL) ELISA Kit 人內皮脂肪酶(EL)檢測試劑盒

Humansreumalbumin,HSAELISAKit 人血清白蛋白(HSA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapigfollicle-stimulatinghormone,FSH檢測試劑盒豚鼠促卵泡素(FSH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母同還原酶(aldo-ketoreductase)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseCholecystokinin,CCKELISAKit小鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠皮層神經元細胞小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(mouse MDC)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠髓過氧化物酶(mouse MPO)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠肌肉生成抑製素(mouse Myostatin)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝