老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养


；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠膀胱上皮分离自膀胱组织
；膀胱是一个储尿器官
，在哺乳类动物
，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内
，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌，逼尿肌收缩
，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出
。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出
。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）
、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。其主要作用有：①组成过滤屏障内壁的重要部分
；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子
；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠膀胱移行上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠膀胱移行上皮经Cytokeratin-AE1/AE3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿

。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠内皮素2(EDN2)检测试剂盒 ，英文名
： EDN2 ELISA Kit

Mouse platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit 小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)检测试剂盒

RatGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 大鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGIP(Humangasicinhibitorypolypeptide)ELISAKit人胃抑素

细胞脯肽酶(prolidase;PLD)紫外比色法定量检测试剂盒20次

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)检测试剂盒规格：96T/48T

SLAMF8重组小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 Protein

Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase 0.5mgAlpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原

AGER重组人 AGER / RAGE 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 标签)

BST1 Protein Rat 重组大鼠 CD157 / BST1 蛋白

胞外5'-核苷酸酶(NT5E)重组蛋白 Recombinant 5'-Nucleotidase, Ecto (NT5E)

CXCL1 Protein Human 重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 标签)

ST6GALNAC2重组小鼠 STHM / ST6GALNAC2 蛋白 Protein

CD53 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, Fc 标签)

EBAG9重组人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 Protein

小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glucokinase regulatory protein (GKRP) ELISA Kit 人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)检测试剂盒

HumanhepatitisBvirusXieractingprotein,HBXIPELISAKit 人乙型肝病毒X蛋白相互作用蛋白(HBXIP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫa检测试剂盒人活化Ⅻ(FⅫa)检测试剂盒规格
：96T/48T

脂肪氧化酶(lipoxygenase)活性比色法定量检测试剂盒20次

MouseangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISAKit小鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测试剂盒规格
：96T/48T

小鼠膀胱移行上皮细胞小鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠巨噬细胞性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠巨噬细胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装