老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠尿道平滑肌分离自尿道管组织
；尿道是从膀胱通向体外的管道
。起自膀胱的尿道内口，止于尿道外口，行程中通过前列腺部、膜部和阴茎海绵体部
，尿道在尿道膜部有一环横行纹肌构成的括约肌
，称为尿道外括约肌
，由意识控制。尿道有三个解剖上的较狭部和膨大部，前者分别位于外口、膜部和内口
，后者位于舟状窝


、球部和前列腺部。尿道壁为粘膜层、粘膜下层和肌肉层所组成
。在前尿道的外面，还包有丰富的弹力纤维和平滑肌纤维的尿道海绵体。尿道粘膜上皮在前列腺部为移行上皮(近膀胱部)
，一部分为多列或复层柱状上皮，在有尿道海绵体的一部分尿道
，主要为复层柱状上皮
，在皱襞上也有单层柱状上皮。特别在舟状窝内有许多环状细胞
，舟状窝的远端部开始有未角化的复层鳞状上皮。粘膜下层血液供应丰富，主要为结缔组织。肌肉层有纵行肌和外环形肌。

方法简介：

实验室分离的小鼠尿道平滑肌采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过平滑肌细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠尿道平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基
：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传2-3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%
；CO2
，5%

小鼠尿道平滑肌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品

：

大鼠γ(FGγ)检测试剂盒 ，英文名： FGγ ELISA Kit

Mouse pregnancy associated plasma protein A (PAPP-A) ELISA Kit 小鼠相关血浆蛋白A(PAPP-A)检测试剂盒

Mousebasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit 小鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforhumanadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit人促肾上腺皮质激素

细胞HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定性检测试剂盒20次

ELISAKitC4大鼠补体蛋白4

ACBD7重组人 ACBD7 蛋白 Protein

Snake poison Protein 蛇毒蛋白 0.5mgSnake poison Protein 蛇毒蛋白

MET重组人 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白

PCSK9 Protein Human 重组人 PCSK9 / NARC1 蛋白

Snake poison Protein 蛇毒蛋白 0.5mgSnake poison Protein 蛇毒蛋白

CXCL1 Protein Human 重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白

ACBD7重组人 ACBD7 蛋白 Protein

PCSK9 Protein Human 重组人 PCSK9 / NARC1 蛋白

MET重组人 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

小鼠泌乳素(PL)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glucokinase (GCK) ELISA Kit 人葡萄糖激酶(GCK)检测试剂盒

HumanAgrinELISAKit 人聚集蛋白(Agrin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAcrineOrange,AO检测试剂盒人橙(AO)检测试剂盒规格：96T/48T

脂肪酸转运功能检测试剂盒20次

MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit小鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠尿道平滑肌细胞小鼠抗IVIgG抗体ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗心肌抗体(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠铜蓝蛋白(CP/CER)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况

，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。