細胞簡介 ：

小鼠尿道平滑肌分離自尿道管組織 ；尿道是從膀胱通向體外的管道 。起自膀胱的尿道內口 ，止於尿道外口 ，行程中通過前列腺部 、膜部和陰莖海綿體部 ，尿道在尿道膜部有一環橫行紋肌構成的括約肌 ，稱為尿道外括約肌 ，由意識控製 。尿道有三個解剖上的較狹部和膨大部 ，前者分別位於外口 、膜部和內口 ，後者位於舟狀窩 、球部和前列腺部 。尿道壁為粘膜層 、粘膜下層和肌肉層所組成。在前尿道的外麵 ，還包有豐富的彈力纖維和平滑肌纖維的尿道海綿體 。尿道粘膜上皮在前列腺部為移行上皮(近膀胱部) ，一部分為多列或複層柱狀上皮 ，在有尿道海綿體的一部分尿道 ，主要為複層柱狀上皮 ，在皺襞上也有單層柱狀上皮 。特別在舟狀窩內有許多環狀細胞 ，舟狀窩的遠端部開始有未角化的複層鱗狀上皮 。粘膜下層血液供應豐富 ，主要為結締組織 。肌肉層有縱行肌和外環形肌 。

方法簡介 ：

實驗室分離的小鼠尿道平滑肌采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法 ，並通過平滑肌細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的小鼠尿道平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

小鼠尿道平滑肌體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠γ(FGγ)檢測試劑盒  ，英文名 ： FGγ ELISA Kit

Mouse pregnancy associated plasma protein A (PAPP-A) ELISA Kit 小鼠相關血漿蛋白A(PAPP-A)檢測試劑盒

Mousebasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISAKit 小鼠堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforhumanadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit人促腎上腺皮質激素

細胞HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定性檢測試劑盒20次

ELISAKitC4大鼠補體蛋白4

ACBD7重組人 ACBD7 蛋白 Protein

Snake poison Protein 蛇毒蛋白 0.5mgSnake poison Protein 蛇毒蛋白

MET重組人 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白

PCSK9 Protein Human 重組人 PCSK9 / NARC1 蛋白

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小鼠泌乳素(PL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glucokinase (GCK) ELISA Kit 人葡萄糖激酶(GCK)檢測試劑盒

HumanAgrinELISAKit 人聚集蛋白(Agrin)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAcrineOrange,AO檢測試劑盒人橙(AO)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

脂肪酸轉運功能檢測試劑盒20次

MouseangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISAKit小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠尿道平滑肌細胞小鼠抗IVIgG抗體ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠銅藍蛋白(CP/CER)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。