老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介

：

小鼠脑动脉血管平滑肌分离自脑动脉组织；脑动脉有成对的颈内动脉和椎动脉互相衔接成动脉循环
；静脉系多不与同名动脉拌行，所收集的静脉血先进入静脉窦再汇入颈内静脉；各级静脉都没有瓣膜。它包括脑的动脉系统和脑的静脉系统。脑动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展


，细胞形态大小不一
，呈梭形

、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长
，高低起伏；细胞密度低时

，常交织成网状

；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点

。

方法简介
：

公司实验室分离的小鼠脑动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠脑动脉血管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后


，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

中文名称   方法   规格

小鼠多巴胺(DA)ELISAKit   ELISA. 

小鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISAKit   ELISA. 

小鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISAKit   ELISA.

猪补体片段3b受体(C3bR)ELISA 试剂盒

Human Legionella aibody IgM (LP Ab-IgM) ELISA Kit 人军团菌抗体IgM(LP Ab-IgM )试剂盒

PorcineGlucoseanspoer2,GL2ELISAKit 猪葡萄糖转运蛋白2(GL2)试剂盒 进口分装

CLIAKitforALK(Humananapasticlymphomakinase)ELISAKit人间变性淋巴瘤激酶

血液卵0脂乙酰转移酶(LCAT)活性荧光定量试剂盒20次

MousevonWillebrandFactor,vWFELISAKit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托辅因子(vWF)试剂盒

IL13重组小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

转乙酰基酶(DLAT)重组蛋白 Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)

NRN1L重组人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白  Protein

ALDH1A3 Protein Human 重组人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 标签)

CD38 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 SCARB3 蛋白

肌肌酸激酶(CKM)天然蛋白 Native Creatine Kinase, Muscle (CKM)

ALDH1A3 Protein Human 重组人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 标签)

PDGFC重组小鼠 PDGF-C / SCDGF 蛋白  Protein

TEK Protein Rat 重组大鼠 Tie2 / TEK 蛋白

SLITRK6重组人 SLITRK6 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠脑动脉血管平滑肌细胞大鼠肝配蛋白B受体3(EPHB3)试剂盒 ，英文名
： EPHB3 ELISA Kit

Rat alpha L fucosidase (AFU) ELISA Kit 大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)试剂盒

RatClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit 大鼠白细胞分化抗原30(CD30)试剂盒 进口分装

CLIAKitforE2ELISAKIT鱼雌二醇

细胞培养污染性支原体M.hominis鉴定16SrDNAPCR扩增试剂盒20次

Ratinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit大鼠诱导型合成酶(iNOS)试剂盒