老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养
：

1

、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

小鼠卵巢上皮分离自卵巢组织

；卵巢是雌性动物的生殖器官

，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素

。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状
，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色
，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢
，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官
，它的外表有一层上皮组织
，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质
。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。卵巢上皮细胞主要功能：①上皮细胞能分泌激素，刺激卵细胞分化成熟；②细胞能分泌炎症介质

，参与炎症反应。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠卵巢上皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠卵巢上皮经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素11(IL-11)检测试剂盒 ，英文名
： IL-11 ELISA Kit

Mouse compleme 1 inhibitor aibody (C1INH) ELISA Kit 小鼠补体1抑制物抗体(C1INH)检测试剂盒

ELISA 小鼠瘦素受体(mouse Leptin receptor)  进口分装

CLIAKitforIL-27(humanIerleukin27)ELISAKit人白介素27

通用型精(arginine)含量高效液相色谱法定量检测试剂盒20次

ELISAKitPDGF-AB大鼠血小板衍生生长因子AB

IL17F重组大鼠 IL17F / IL-17F 蛋白 Protein

Collagen III (Anti-Collagen Type III 0.5mgCollagen III (Anti-Collagen Type III ) 抗Ⅲ型胶原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型胶原)

KDR重组人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 Protein

FUT8 Protein Human 重组人 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 标签)

BST1 Protein Mouse 重组小鼠 CD157 / BST1 蛋白

Collagen III (Anti-Collagen Type III 0.5mgCollagen III (Anti-Collagen Type III ) 抗Ⅲ型胶原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型胶原)

FUT8 Protein Human 重组人 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 标签)

IL17F重组大鼠 IL17F / IL-17F 蛋白 Protein

BST1 Protein Mouse 重组小鼠 CD157 / BST1 蛋白

KDR重组人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 Protein

小鼠补体片段3b受体(C3bR)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat prostate specific aigen (PSA) ELISA Kit 大鼠前列腺特异性抗原(PSA)检测试剂盒

HumanUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 人型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanBoneMorphogeneticProtein6,BMP-6检测试剂盒人骨形成蛋白6(BMP-6)检测试剂盒规格：96T/48T

植物总糖蛋白树脂法化试剂盒5次

HumanSeptokinase,SKELISAKit人链激酶(SK)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠卵巢上皮细胞兔子中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子脂联素(ADP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

兔子孕激素/孕(PROG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装