老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

小鼠淋巴血管内皮分离自淋巴血管组织；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成
。其形态结构与静脉相似，但管径较细，管壁较薄，瓣膜较多且发达，外形呈串珠状
。淋巴管根据其位置分为浅
、深二种
。它们管位于皮下
，常与浅静脉伴行，收集皮肤和皮下组织的淋巴。深淋巴管与深部血管伴行
，收集肌肉和内脏的淋巴。浅
、深淋巴管之间有广泛的交通支
。淋巴管在向心行程中，通常经过一个或多个淋巴结，从而把淋巴细胞带入淋巴液。主要功能是滤过淋巴液，产生淋巴细胞和浆细胞
，参与机体的免疫反应
。当局部感染时，细菌、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入
，引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们，则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移。淋巴管内皮细胞（LEC）是衬覆于淋巴管内表面的一种单层扁平上皮，是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡，调节淋巴细胞再循环和机体的免疫反应和组织液及蛋白质的运输

，在疾病过程中也起着重要作用。近年研究表明，LEC还在伤口愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程中起重要作用，而且与肿瘤转移密切相关。淋巴管内皮细胞主要功能
：①调节体液
、蛋白和组织压力平衡；②为免疫系统的重要组成部分。淋巴管内皮细胞与主要病生理变化：①囊肿型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴结核

。

方法简介：

实验室分离的小鼠淋巴血管内皮采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠淋巴血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基
：含FBS
、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气

，95%；CO2，5%

小鼠淋巴血管内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠血管生成素4(ANGPT4)检测试剂盒 ，英文名： ANGPT4 ELISA Kit

Mouse prostatic acid phosphatase (PAP) ELISA Kit 小鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)检测试剂盒

Mouseplaceagrowthfactor,PLGFELISAkit 小鼠胎盘生长因子(PLGF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanBeta-lactamaseELISAKit人β内酰胺酶

细胞DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20次

ELISAKitAIF大鼠凋亡诱导因子

HA重组甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

pre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原 0.5mgpre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原)

AKT1重组人 AKT1 / PKB / PKBα 蛋白 Protein

CTF1 Protein Human 重组人 Cardiotrophin-1 / CTF1 蛋白 (Fc 标签)

DPP7 Protein Human 重组人 DPP7 / DPPII / DPP2 蛋白

pre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原 0.5mgpre S1/S2 protein [HBV] 乙肝病毒pre S1/乙肝病毒pre S2(抗原)

CTF1 Protein Human 重组人 Cardiotrophin-1 / CTF1 蛋白 (Fc 标签)

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小鼠脑素/脑尿肽(BNP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human caneous T cell atacting chemokine (CTACK/CCL27) ELISA Kit 人皮肤T细胞虏获趋化因子(CTACK/CCL27)检测试剂盒

HumanGrowthHormoneBindingProtein,GHBPELISAKit 人生长激素结合蛋白(GHBP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human50%complemehemolysis,CH50检测试剂盒人血清总补体(CH50)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母总巯基含量荧光定量检测试剂盒20次

Mouseai-thrombieceptor,AELISAKit小鼠抗受体(A)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠淋巴血管内皮细胞小鼠抗酸性0酸酶检测试剂盒   小鼠抗酸性0酸酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗酸性0酸酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
：小鼠抗酸性0酸酶试剂盒
、小鼠抗酸性0酸酶eisa试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠解整合素样金属蛋白酶检测试剂盒   小鼠解整合素样金属蛋白酶试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠解整合素样金属蛋白酶试剂盒
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：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠碱性0酸酶检测试剂盒   小鼠碱性0酸酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠碱性0酸酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
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：6个月
。

小鼠甲基化酶检测试剂盒   小鼠甲基化酶试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠甲基化酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠甲基化酶试剂盒
、小鼠甲基化酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。