老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠冠状动脉成纤维分离自冠状动脉组织；冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支
，行于心脏表面。采用Schlesinger等的分类原则
，将冠状动脉的分布分为三型：右优势型
、均衡型
、左优势型

。左右冠状动脉是升主动脉的对分支

。左冠状动脉为一短干

，发自左主动脉窦，经肺动脉起始部和左心耳之间，沿冠状沟向左前方行后
，立即分为前室间支和旋支。前室间支沿前室间沟下行，旋支绕过心尖切迹至心的膈面与右冠状动脉的后室间支相吻合
。它是构成冠状动脉壁的主要细胞成分，细胞膜上分布着多种离子通道
，如电压依赖性Na+通道
、多种Ca2+通道和K+通道；它们参与了静息电位的维持与细胞膜电位的复极化、超极化，调节血管平滑肌的收缩及舒张功能，此外动脉粥样硬化的发展也涉及冠状动脉平滑肌细胞增殖

、炎症及凋亡等。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化

；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密

，有的交叉重叠生长，平坦

、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大

，呈椭圆形，颜色淡

。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的小鼠冠状动脉成纤维采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶

。

质量检测

实验室分离的小鼠冠状动脉成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息


：

培养基
：含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2
，5%

小鼠冠状动脉成纤维体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态

。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠三叶因子1(TFF1)检测试剂盒 ，英文名： TFF1 ELISA Kit

Mouse sex hormone binding globulin (SHBG) ELISA Kit 小鼠性激素结合球蛋白(SHBG)检测试剂盒

RatEndotheliallipase,ELELISAKit 大鼠内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHA(MouseHyaluronicacid)ELISAKit小鼠透明质酸

细胞半胱蛋白酶-8(CASPASE-8)活性荧光定量检测试剂盒20次

RatVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISAKit大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)检测试剂盒规格：96T/48T

SELE重组小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 标签) Protein

环氧化合物水解酶4(EPHX4)重组蛋白 Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

EDEM2重组人 EDEM2 / C20orf31 蛋白 Protein

CSNK2A1 Protein Human 重组人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 标签)

IL11RA Protein Canine 重组狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白

环氧化合物水解酶4(EPHX4)重组蛋白 Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)

CSNK2A1 Protein Human 重组人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 标签)

SELE重组小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL11RA Protein Canine 重组狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白

EDEM2重组人 EDEM2 / C20orf31 蛋白 Protein

小鼠尿微量白蛋白(ALB)检测试剂盒 96T/48T

Rat parathyroid hormone related protein (PTHrP) ELISA Kit 大鼠甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)检测试剂盒

Humandynorphin,DynELISAKit 人强啡肽(Dyn)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Human25-DihydroxyvitaminD3,HVD3检测试剂盒人25羟基3(25(OH)D3/25HVD3)检测试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母纤维素酶(cellulase)活性比色法定量检测试剂盒20次

MouseApolipoproteinE,Apo-EELISAKit小鼠载脂蛋白E(Apo-E)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠冠状动脉成纤维细胞小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠活化蛋白C(APC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠(ypsin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。