老哥俱乐部

细胞简介：

小鼠肺成纤维分离自肺组织；肺是机体的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆盖于心之上
。肺有分叶
，左二右三，共五叶。肺经肺系（指气管
、支气管等）与喉
、鼻相连
，故称喉为肺之门户，鼻为肺之外窍
。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大
，轮廓清楚
，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足
，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀
，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡


。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。肺成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺器官的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠肺成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的小鼠肺成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3-5代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

实验报告
：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min


；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

猪流感病毒通用型(SIV-U)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

猪流感病毒通用型(SIV-U)核酸试剂盒(-PCR法)   48T

马流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T

马流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸试剂盒(-PCR法)   48T

猪内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 试剂盒

Human thyroxine binding globulin (TBG) ELISA Kit 人甲状腺结合球蛋白(TBG)试剂盒

guineapigansforminggrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit 豚鼠转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 进口分装

CLIAKitforAmylinELISAKit大鼠胰淀素

血液S转移酶(GSHST)总活性比色法定量试剂盒20次

PorcineapoproteinB100,apo-B100ELISAKit猪载脂蛋白B100(apo-B100)试剂盒

CD38重组食蟹猴 SCARB3 蛋白 (His 标签) Protein

IL-7(Interleukin-7 0.5mgIL-7(Interleukin-7) 白介素7抗原

LYPD3重组人 C4.4A / LYPD3 蛋白 (His 标签) Protein

ASF1B Protein Human 重组人 ASF1B 蛋白 (His 标签)

S100A1 Protein Mouse 重组小鼠 S100A1 蛋白 (His 标签)

IL-7(Interleukin-7 0.5mgIL-7(Interleukin-7) 白介素7抗原

ASF1B Protein Human 重组人 ASF1B 蛋白 (His 标签)

CD38重组食蟹猴 SCARB3 蛋白 (His 标签) Protein

S100A1 Protein Mouse 重组小鼠 S100A1 蛋白 (His 标签)

LYPD3重组人 C4.4A / LYPD3 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠肺成纤维细胞大鼠和肽素(copeptin)试剂盒 ，英文名： copeptin ELISA Kit

Rabbit renin (Renin) ELISA Kit 兔肾素(Renin)试剂盒

绿脓杆菌(PA)核酸试剂盒 48T

CLIAKitforMouseAi-nuclearAibody,ANAELISAKit小鼠抗核抗体

体液肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性比色法定量试剂盒25次

ELISAKitMHC/DLA犬主要组织相容性复合体

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。