老哥俱乐部

细胞简介
：

小鼠大隐静脉内皮分离自大隐静脉；大隐静脉起于足背静脉弓内侧端，经内踝前方，沿小腿内侧缘伴隐神经上行
，经股骨内侧髁后方，进入大腿内侧部
，与股内侧皮神经伴行，逐渐向前上，在耻骨结节外下方穿隐静脉裂孔，汇入股静脉，其汇入点称为隐股点
。有5条属支：旋髂浅静脉、腹壁浅静脉、外静脉、股内侧浅静脉和股外侧浅静脉，它们汇入大隐静脉的形式多样
，相互间吻合丰富。大隐静脉曲张行高位结扎时，须分别结扎、切断各属支，以防复发

。大隐静脉内皮细胞对维持大隐静脉动态平衡起着重要作用。它们合成

、分泌凝血和纤溶系统的激活因子和抑制因子、影响血小板粘附和聚集的调节因子；大隐静脉内皮细胞还释放控制细胞增殖和调节血管壁紧张度的分子。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠大隐静脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的小鼠大隐静脉内皮经CD31免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%

；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4

、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

总合成酶（NOS）测试盒[测总NOS（T－NOS）]

（NO）测定试剂盒（微板法）

（NO）测定试剂盒（还原酶法）

ATP酶测试盒（测普通组织匀浆的Na+K+
、Ca2+Mg2+－ATP酶，样本前处理不需高速离心）

猪组胺(HIS)ELISA 试剂盒

Human lipid peroxide / lactoperoxidase (LPO) ELISA Kit 人过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)试剂盒

RabbitThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFIELISAKit 兔纤溶抑制因子/激活的纤溶抑制物(TAFI)试剂盒 进口分装

CLIAKitforApo-E(MouseApolipoproteinE)ELISAKit小鼠载脂蛋白E

溴脱氧尿核苷(BrdU)溶液(1毫摩尔)1毫升

PorcineMelatonin,MTELISAKit猪褪黑素(MT)试剂盒

IL12A & IL12B重组小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

Lin-28同源物A(LIN28A)重组蛋白 Recombinant Lin-28 Homolog A (LIN28A)

RCN3重组人 RCN3 蛋白 (His 标签) Protein

C1QBP Protein Human 重组人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 标签)

GPT Protein Rat 重组大鼠 GPT1 / GPT 蛋白 (His 标签)

癌胚抗原(CEA)重组蛋白 Recombinant Carcinoembryonic Antigen (CEA)

C1QBP Protein Human 重组人 HABP1 / C1QBP / GC1QBP 蛋白 (His 标签)

BCAM重组小鼠 BCAM 蛋白 (His 标签) Protein

FGFR1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 标签)

GSTZ1重组人 GSTZ1 蛋白 (His 标签) Protein

小鼠大隐静脉内皮细胞大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)试剂盒
，英文名： NF-κB p65 ELISA Kit

Rabbit heat shock protein 40 (HSP-40) ELISA Kit 兔热休克蛋白40(HSP-40)试剂盒

麻疹病毒(MV)核酸试剂盒(-PCR法) 48T

CLIAKitforMouseBeta-Defensins,Beta-DFELISAKit小鼠β-防御素

体液肌酸激酶(CK)总活性比色法定量试剂盒25次

ELISAKit1,3-βDglucosidase人1,3-βD葡葡糖苷酶

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片

，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代


。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。