老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

小鼠鼻黏膜成纤维分离自鼻黏膜组织

；黏膜是覆盖在机体内消化、呼吸
、泌尿、生殖等器官管腔内壁的一层组织结构
，由上皮组织和疏松结缔组织构成
。根据部位不同，有口腔黏膜、胃肠黏膜、鼻腔黏膜、气管黏膜、阴道黏膜、眼睑黏膜等不同名称
。它们的结构也因功能

、部位不一而不尽相同
。鼻腔黏膜，简称鼻黏膜，覆盖于鼻腔表面
，黏膜下方为软骨、骨或骨骼肌
。成纤维细胞是结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团；细胞排列紧密，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大

，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。

方法简介

：

实验室分离的小鼠鼻黏膜成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过成纤维细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的小鼠鼻黏膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%

；CO2，5%

小鼠鼻黏膜成纤维体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠细胞周期素D1(CCND1)检测试剂盒


，英文名

： CCND1 ELISA Kit

Mouse three iodothyronine (T3) ELISA Kit 小鼠三甲状腺原(T3)检测试剂盒

MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit 小鼠S100蛋白(S-100)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHSVII-Ab(HumanHerpessimplexvirusIIaibody)ELISAKit人单疱疹病毒Ⅱ型抗体

细胞IKKβ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitLTE4大鼠白三烯E4

MET重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

IGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3 0.5mgIGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3) 胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗原

EPOR重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白 Protein

CPNE1 Protein Human 重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 (SUMO 标签)

TSLP Protein Mouse 重组小鼠 TSLP 蛋白

IGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3 0.5mgIGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3) 胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗原

CPNE1 Protein Human 重组人 CPNE1 / Copine I / CPN1 蛋白 (SUMO 标签)

MET重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 Protein

TSLP Protein Mouse 重组小鼠 TSLP 蛋白

EPOR重组人 EPO Receptor / EPOR 蛋白 Protein

小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ornithine carbamoyl ansferase (OCT) ELISA Kit 人鸟氨基甲酰转移酶(OCT)检测试剂盒

Humanmultidrugresistance-associatedprotein,MRPELISAKit 人多药耐药相关蛋白(MRP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigIerleukin-12,IL-12/P70检测试剂盒豚鼠白介素12(IL-12/P70)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性滤膜染色试剂盒20次

MouseCalfiestinalalkalinephosphatase,CIAPELISAKit小鼠牛小肠碱性0酸酶(CIAP)检测试剂盒规格：96T/48T

小鼠鼻黏膜成纤维细胞小鼠内皮素-1   英文名称：   Endothelin-1   规格：      英文缩写：   ET-1

小鼠嗜酸性粒细胞趋化因子   英文名称：   Eotaxin   规格：      英文缩写：   Eotaxin

小鼠促红细胞生成素   英文名称：   erythropoietin   规格：      英文缩写：   EPO

小鼠红细胞生成素受体   英文名称
：   erythropoietin receptor   规格：      英文缩写：   EPOR