老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔真皮毛乳头分离自皮肤毛囊组织
；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头
，中心是一根毛发
，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下组织中
，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织。毛囊实际上是由结缔组织和上皮两部分所组成

，除了具有结缔组织和血管的真皮乳头（毛乳头）外，毛囊其余部分都是由表皮细胞分化而来
。真皮毛乳头细胞位于毛囊基底部，是一类成纤维细胞。在毛囊发育早期，真皮细胞向单层上皮细胞发出真皮信号

，刺激上皮局部形成毛基板。随后毛基板细胞向下方的真皮发出表皮信号
，诱导其形成有成纤维细胞组成的凝集细胞团。在此过程中
，毛母质细胞逐渐包裹凝集细胞团，形成成熟的真皮毛乳头细胞。作为毛囊中的重要细胞群
，真皮毛乳头细胞的分子机制和临床应用正在被逐渐认识和解析。

方法简介

：

实验室分离的兔真皮毛乳头采用胶原酶-混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的兔真皮毛乳头经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息

：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：梭形
、多角形

传代特性：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔真皮毛乳头体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

（NO）测定试剂盒（还原酶法）

超氧化物歧化酶（SOD）分型测试盒（羟胺法）

微量二（MDA）测定试剂盒（TBA法）

—S转移酶（GSH-ST）试剂盒（比色法）

鸭胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai hCG aibody (AhCGAb) ELISA Kit 人抗人绒毛膜抗体(AhCGAb)试剂盒

HumanMotilin,MTLELISAKit 人胃动素(MTL)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAcSDKPELISAKit大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯

血影细胞膜荧光染色试剂盒20次

Mouseplateletfactor3,PF3ELISAKit小鼠血小板因子3(PF-3)试剂盒规格：96T/48T

SFRP2重组小鼠 sFRP2 蛋白 Protein

C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun
：active protein 1 0.5mgC-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun：active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)

APEX1重组人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 Protein

CAMK1G Protein Human 重组人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 蛋白 (His & GST 标签)

MCPT1 Protein Mouse 重组小鼠 MCPT1 蛋白

C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun：active protein 1 0.5mgC-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun：active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)

CAMK1G Protein Human 重组人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 蛋白 (His & GST 标签)

SFRP2重组小鼠 sFRP2 蛋白 Protein

MCPT1 Protein Mouse 重组小鼠 MCPT1 蛋白

APEX1重组人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 Protein

兔真皮毛乳头细胞大鼠肌钙蛋白T(Tn-T)试剂盒 ，英文名

： Tn-T ELISA Kit

Rabbit Bcl-2 associated X protein (BAX) ELISA Kit 兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)试剂盒

牛(BCV)核酸试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMouseSlit2ELISAKit小鼠Slit2

体液钙离子浓度比色法定量试剂盒20次

ELISAKit6-K-PG人6同前列腺素