老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养

：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3

、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后

，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次

，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次

，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔小脑颗粒分离自小脑皮层组织；神经元是神经系统基本的结构与功能单位，小脑颗粒神经元是体积较小的神经元
，直径约10μm，在中枢神经系统中含量非常丰富
，近乎神经元数量的一半
。由于小脑神经元的生长、分化和大脑皮层神经元相似，而且数量多
、便于取材，因此小脑颗粒神经元是研究神经元生长发育
、神经轴突再生及神经疾病发生机制和临床神经药理的重要手段。小脑颗粒神经元是小脑主要的中间神经元，在哺乳动物的小脑内数量为丰富。颗粒神经元的轴突与苔状纤维和爬行纤维相联系，形成小脑皮层内的神经元环路，在小脑的神经活动中起着非常重要的作用。在动物传染性海绵状脑病中
，病变可波及小脑颗粒神经元，导致小脑皮层的神经元环路受损，从而呈现神经性行为失调
。研究小脑颗粒神经元在动物传染性海绵状脑病病理学变化中的反应、病理发生的机理特别是分子机理，有赖于小脑颗粒神经元细胞模型的建立。小脑颗粒细胞的轴突是沿冠状轴分布的平行纤维，正是这种排列保证了兴奋的单向传导，这是小脑功能理论中的关键假设，小脑颗粒细胞通过g-氨基丁酸接受戈尔吉细胞的抑制性突触的信息传入。

方法简介：

实验室分离的兔小脑颗粒采用消化法结合神经元专用培养基
、化学试剂抑制法筛选制备而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔小脑颗粒经NSE免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含B-27
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：神经元细胞样

传代特性：属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%
；CO2

，5%

兔小脑颗粒体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息

，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品
：

大鼠尿卟啉原脱羧酶(UROD)检测试剂盒 ，英文名

： UROD ELISA Kit

Monkey E selectin (E-Selectin/CD62E) ELISA Kit 猴E选择素(E-Selectin/CD62E)检测试剂盒

RatvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGM-CSFAb(Humanai-Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactoraibody)ELISAKit人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体

细胞氧化酶(DAO)活性荧光定量检测试剂盒20次

RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit大鼠超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒规格：96T/48T

EPHA4重组食蟹猴 EphA4 蛋白 (Fc 标签) Protein

MMP-1 基质金属蛋白酶-1 0.5mgMMP-1 基质金属蛋白酶-1

SERPINA12重组人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 Protein

IL10 Protein Human 重组人 IL10 / Interleukin-10 蛋白

F7 Protein Mouse 重组小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

MMP-1 基质金属蛋白酶-1 0.5mgMMP-1 基质金属蛋白酶-1

IL10 Protein Human 重组人 IL10 / Interleukin-10 蛋白

EPHA4重组食蟹猴 EphA4 蛋白 (Fc 标签) Protein

F7 Protein Mouse 重组小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

SERPINA12重组人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 Protein

豚鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)检测试剂盒 
，英文名： ANG-Ⅱ ELISA Kit

Human proteolipid protein (PLP) ELISA Kit 人蛋白脂质蛋白抗体(PLP)检测试剂盒

Monkeyacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit乙酰受体抗体(AChRab)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBMG/Beta2-MG(HumanBeta2-microglobulin)ELISAKit人β2微球蛋白

细菌内毒素浊度法定量检测试剂盒20次

RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/RLAⅡELISAKit兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)检测试剂盒规格：96T/48T

兔小脑颗粒细胞十六烷基基溴化胺   50g

CTAB   250g

5’-三0酸胞苷三盐   50mg

CTP   100mg