老哥俱乐部

细胞简介：

兔小肠黏膜上皮分离自小肠组织
；小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通
，下端通过阑门与大肠相连，是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠
、空肠和回肠三部分
。小肠内消化是至关重要的，因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后，基本上完成了消化过程，同时营养物质被小肠黏膜吸收了
。小肠管壁由黏膜、黏膜下层、肌层和浆膜构成
。其结构特点是管壁有环形皱襞
，黏膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺
，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切；构成肠腺的细胞有柱状细胞、杯状细胞、潘氏细胞和未分化细胞。柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似，接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似，绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短，不形成纹状缘。小肠有三种功能即消化
、吸收和分泌及运动功能，其中以吸收和分泌功能为主
。平滑肌细胞的收缩是负责肠蠕动的动力
，促使食物向下运动
。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中
，也是机体面对病原微生物的道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外
，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用

，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度
。

方法简介：

实验室分离的兔小肠黏膜上皮采用先机械分离法
、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔小肠黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV


、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态
：上皮细胞样

传代特性

：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%；CO2，5%

兔小肠黏膜上皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

人载脂蛋白E(Apo-E)ELISA 试剂盒

Human TNF related activation induced cytokine (ANCE) ELISA Kit 人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(ANCE)检测试剂盒

Humanierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISAKit 人γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanInhibin,INH检测试剂盒人抑制素(INH)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-7)活性荧光定量检测试剂盒20次

HumanLeptieceptor,LEPRELISAKit人瘦素受体(LEPR)检测试剂盒规格：96T/48T

PVRL1重组大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (Fc 标签) Protein

Gastrin(human 0.5mgGastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源)

F7重组人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

IZUMO4 Protein Human 重组人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 标签)

ACE2 Protein Mouse 重组小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 标签)

Gastrin(human 0.5mgGastrin(human)peptide(1-17) 胃泌素/蛙皮素(多肽人源)

IZUMO4 Protein Human 重组人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 标签)

PVRL1重组大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 (Fc 标签) Protein

ACE2 Protein Mouse 重组小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 标签)

F7重组人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白 Protein

豚鼠白介素12(IL-12/P70)检测试剂盒 ，英文名： IL-12/P70 ELISA Kit

Human nonmethylated oligonucleotide (NON) ELISA Kit 人非甲基化寡核苷酸(NON)检测试剂盒

RabbitEpidermalgrowthfactor,EGFELISAKit 兔子表皮生长因子(EGF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta2-GP1IgA/G/M(HumanBeta2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M)ELISAKit人β2糖蛋白1抗体IgA/G/M

细菌印度墨负性染色试剂盒50次

RabbitE-SelectinELISAKit兔子E选择素(E-Selectin/CD62E)检测试剂盒规格
：96T/48T

兔小肠黏膜上皮细胞人载脂蛋白A1(apo-A1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人载脂蛋白B100(apo-B100)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人白血病抑制因子受体(LIFR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

A(IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。