實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔下腔靜脈內皮分離自下腔靜脈組織 ；下腔靜脈是體內大的靜脈 ，收集下肢 、盆部和腹部的靜脈血 。下腔靜脈由左 、右髂總靜脈匯合而成 ，匯合部位多在第5腰椎水平 ，少數平第4腰椎 。下腔靜脈位於脊柱的右前方 ，沿腹主動脈的右側上行 ，經肝的腔靜脈溝 、穿 膈的腔靜脈孔 ，開口於右心房 。下腔靜脈的前麵有肝 、胰頭 、十二指腸水平部、右睾丸動脈及小腸係膜根越過 。後麵為有膈腳 、第1～4腰椎 、有腰交感幹和腹主動脈的壁支 。右側與 腰大肌 、右腎 、右腎上腺相鄰 ，左側為腹主動脈。下腔靜脈的屬支有髂總靜脈 、右睾丸靜脈 、腎靜脈 、右腎上腺靜脈 、肝靜脈 、膈下靜脈和腰靜脈 ，其中大部分 屬支與同名動脈伴行 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔下腔靜脈內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔下腔靜脈內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 ：PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：內皮細胞樣

傳代特性 ：可傳2-3代

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔下腔靜脈內皮體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

人優球蛋白(EL)ELISA 試劑盒

Human ansforming growth factor alpha (TGF- alpha) ELISA Kit 人轉化生長因子α(TGF-α)檢測試劑盒

HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORsELISAKit 人核仁形成區嗜銀蛋白(Ag-NORs)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanIerferonαAibody,IFNα-Ab檢測試劑盒人抗α幹擾素抗體(IFNα-Ab)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

組織精(arginine)含量酶連續循環反應比色法定量檢測試劑盒20次

Humanisociatedehydrogenase,ICDELISAKit人異檸檬酸脫氫酶(ICD)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

KNG1重組小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein

Beta-Amyloid 1-42 CT β澱粉樣肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β澱粉樣肽 1-42 (C端多肽)

SCN3B重組人 SCN3B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

SLC3A2 Protein Rat 重組大鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白

Beta-Amyloid 1-42 CT β澱粉樣肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β澱粉樣肽 1-42 (C端多肽)

ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重組人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

KNG1重組小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein

SLC3A2 Protein Rat 重組大鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白

SCN3B重組人 SCN3B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

豚鼠白介素1β(IL1B)檢測試劑盒  ，英文名： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素結合酶(E2/UBCE)檢測試劑盒

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CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人絨毛膜β

細菌乙醇脫氫酶總活性(NDMA)比色法定量檢測試劑盒20次

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔下腔靜脈內皮細胞人載脂蛋白H(Apo-H)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人載脂蛋白E(Apo-E)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人載脂蛋白C3(APO-C3)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人載脂蛋白C2(Apo-C2)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝