老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次

，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

兔下腔静脉内皮分离自下腔静脉组织；下腔静脉是体内大的静脉，收集下肢
、盆部和腹部的静脉血。下腔静脉由左
、右髂总静脉汇合而成，汇合部位多在第5腰椎水平，少数平第4腰椎
。下腔静脉位于脊柱的右前方，沿腹主动脉的右侧上行，经肝的腔静脉沟、穿 膈的腔静脉孔，开口于右心房。下腔静脉的前面有肝、胰头
、十二指肠水平部
、右睾丸动脉及小肠系膜根越过。后面为有膈脚
、第1～4腰椎、有腰交感干和腹主动脉的壁支。右侧与 腰大肌、右肾、右肾上腺相邻，左侧为腹主动脉

。下腔静脉的属支有髂总静脉
、右睾丸静脉
、肾静脉

、右肾上腺静脉
、肝静脉

、膈下静脉和腰静脉
，其中大部分 属支与同名动脉伴行。

方法简介
：

实验室分离的兔下腔静脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法
、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔下腔静脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基
：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性
：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性

：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气，95%；CO2，5%

兔下腔静脉内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

人优球蛋白(EL)ELISA 试剂盒

Human ansforming growth factor alpha (TGF- alpha) ELISA Kit 人转化生长因子α(TGF-α)检测试剂盒

HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins,Ag-NORsELISAKit 人核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanIerferonαAibody,IFNα-Ab检测试剂盒人抗α干扰素抗体(IFNα-Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

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Humanisociatedehydrogenase,ICDELISAKit人异柠檬酸脱氢酶(ICD)检测试剂盒规格：96T/48T

KNG1重组小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein

Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉样肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β淀粉样肽 1-42 (C端多肽)

SCN3B重组人 SCN3B 蛋白 (Fc 标签) Protein

ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重组人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

SLC3A2 Protein Rat 重组大鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白

Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉样肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β淀粉样肽 1-42 (C端多肽)

ITGA6 & ITGB1 Protein Human 重组人 ITGA6 & ITGB1 Heterodimer 蛋白

KNG1重组小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 蛋白 Protein

SLC3A2 Protein Rat 重组大鼠 SLC3A2 / CD98 蛋白

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豚鼠白介素1β(IL1B)检测试剂盒 
，英文名
： IL1B ELISA Kit

Human ubiquitin conjugating enzyme (E2/UBCE) ELISA Kit 人泛素结合酶(E2/UBCE)检测试剂盒

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit 兔子白介素6(IL-6)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-CG(HumanChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit人绒毛膜β

细菌乙醇脱氢酶总活性(NDMA)比色法定量检测试剂盒20次

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兔下腔静脉内皮细胞人载脂蛋白H(Apo-H)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

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人载脂蛋白C3(APO-C3)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人载脂蛋白C2(Apo-C2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装