老哥俱乐部

细胞简介
：

兔外周血DC分离自外周血，由外周血单核细胞诱导而成的；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中

，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，老哥俱乐部把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。树突状细胞分为成熟树突状细胞和未成熟树突状细胞
，典型的未成熟树突状细胞呈半贴壁生长，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串样集落，细胞大而形态不规则，表面皱褶多，亦可见少量短刺状突，胞内细胞器丰富并可见吞噬泡
，具有较强的迁移能力，伴随有部分未诱导成的单核细胞，贴壁形态多样。而成熟的树突状细胞由未成熟DC进一步经TNFα、LPS等诱导而成，多数呈悬浮生长
， 细胞呈圆形，细胞体积进一步增大，表面大量粗细不等的树枝样突起（高倍镜或者电镜下可观察到 ），伴随少量贴壁未成熟细胞或者单核细胞
。未成熟DC细胞长时间培养也可能导致自发分化成熟。DC细胞尚无特异性细胞表面分子标志，主要通过形态学、组合性细胞表面标志
、在混合淋巴细胞反应中能激活初始T细胞等特征进行鉴定。其中成熟树突状细胞表面高表达主要组织相容性复合物（MHC）以及CD80、CD86等共刺激分子
，进而激活T淋巴细胞
，诱导免疫应答，处于启动、调控
、并维持免疫应答的中心环节；未成熟树突状细胞具有很强的抗原摄取加工能力，但由于缺乏多种共刺激分子不能使初始T细胞活化、增殖产生免疫应答
，不能激活T细胞的信号
，可导致T细胞无能

，从而诱导免疫低反应或抗原免疫特异性耐受。未成熟树突状细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子等共刺激分子表达较低，一般在30%以下

。

方法简介
：

实验室分离的兔外周血未成熟DC采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞、培养过程添加细胞因子诱导而来

，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔外周血树突状(未成熟DC细胞)经CD86免疫荧光鉴定
、细胞形态等综合鉴定
，纯度可达80%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基：含FBS、生长添加剂

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性

：半贴壁半悬浮

细胞形态：圆形
、梭形、多角形，形态多样

传代特性
：属于高度分化细胞

；属于不增殖细胞群

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小


；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基

，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次


，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠跨膜蛋白27(TMEM27)检测试剂盒 
，英文名
： TMEM27 ELISA Kit

Monkey macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)检测试剂盒

Ratdopamine,DAELISAKit 大鼠多巴胺(DA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFT4游离T4

细胞花生四烯酸(arachidonicacid)酶反应比色法定量检测试剂盒20次

Ratplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISAKit大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)检测试剂盒规格：96T/48T

CEACAM1重组小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白 Protein

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1 0.5mgB7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配体1(多肽)

CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 标签) Protein

IGFBP6 Protein Human 重组人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白

F3 Protein Rat 重组大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1 0.5mgB7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1) 程序性死亡配体1(多肽)

IGFBP6 Protein Human 重组人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白

CEACAM1重组小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白 Protein

F3 Protein Rat 重组大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白

CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 标签) Protein

豚鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human aconitase 2 (ACO-2) ELISA Kit 人乌头酸酶2(ACO-2)检测试剂盒

HumanNoradrenalineBitaas,NE-BELISAKit 人重去甲(NE-B)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumancrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,X检测试剂盒人Ⅰ型胶原N末端肽(X)检测试剂盒规格

：96T/48T

组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20次

HumanProstaglandinF2α，PGF2αELISAKit人前列腺素F2α(PGF2α)检测试剂盒规格：96T/48T

兔外周血树突状细胞 (未成熟DC细胞)四甲基化铵   100g

TMA   500g

四甲基胺   5g

TMB   1g

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。