老哥俱乐部

细胞简介
：

兔外周血白分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液
，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，老哥俱乐部把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念。白细胞是一类无色、球形、有核的血细胞
。白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类

：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞，其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同，分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种
。根据白细胞的细胞质内有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞。前者常简称为粒细胞
，根据其特殊颗粒的染色特性，又分为中性粒细胞
、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞
，白细胞也通常被称为免疫细胞。在显微镜下可以看到，血细胞中体积比较大、数量比较少
，具有细胞核；其主要作用是吞噬细菌、防御疾病
。

方法简介：

公司实验室分离的兔外周血白采用取外周血
、通过密度梯度离心法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的兔外周血白经过检测，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 圆形

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

兔外周血白体外培养周期有限；建议使用公司

实验报告：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min

；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

小鼠状腺原酸(T3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠补体片断5a(C5a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠补体片断3a(C3a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠17羟孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠结合蛋白(RBP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit A(IgA)试剂盒

HumanAquaporin2,AQP-2ELISAKit 人水通道蛋白2(AQP-2)试剂盒 96T/48T 进口分装

Elisa伪狂犬病毒gE2.0抗体诊断试剂盒5*96孔5*96孔

真菌/酵母a-(a-AMYLASE)活性EPS-G7酶偶联比色法定量试剂盒20次

MouseC-telopeptideoftypeⅠcollagen,CTX-ⅠELISAKit小鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)试剂盒规格
：96T/48T

HAVCR2重组食蟹猴 TIM3 / HAVCR2 蛋白 (Fc 标签) Protein

IGF-II( Insulin-like Growth Factor-II 0.5mgIGF-II( Insulin-like Growth Factor-II ) 胰岛素样生长因子-II(抗原)

MMP8重组人 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

CMPK1 Protein Human 重组人 CMPK1 蛋白

PRL Protein Mouse 重组小鼠 PRL / Prolactin 蛋白

IGF-II( Insulin-like Growth Factor-II 0.5mgIGF-II( Insulin-like Growth Factor-II ) 胰岛素样生长因子-II(抗原)

CMPK1 Protein Human 重组人 CMPK1 蛋白

HAVCR2重组食蟹猴 TIM3 / HAVCR2 蛋白 (Fc 标签) Protein

PRL Protein Mouse 重组小鼠 PRL / Prolactin 蛋白

MMP8重组人 MMP-8 / CLG1 蛋白 Protein

兔外周血白细胞大鼠甲状旁腺素受体2(PTHR2)试剂盒

，英文名： PTHR2 ELISA Kit

Mouse tumor necrosis factor soluble receptor I (TNFsR- I) ELISA Kit 小鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)试剂盒

Ratcarbonicanhydrase2,CA-2ELISAKit 大鼠酶2(CA-2)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforFEP(HumanFreeerythrocyteproloporphyrin)ELISAKit人游离原卟啉

细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)活性荧光定量试剂盒20次

Ratnuclearfactor-κBp65,NF-κBp65ELISAKit大鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)试剂盒规格：96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。