老哥俱乐部

① 组织块培养法

组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长
。

② 消化培养法

③ 悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞
，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养
，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

④器官培养

器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

产品名称
：兔胎盘绒毛膜滋养层细胞

英文名称：Rabbit Placental Amniotic Cells

组织来源：胎盘

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

兔胎盘绒毛膜滋养层分离自胎盘组织
；胎盘（placenta）是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官

，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在子宫中发育
，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性
。胎盘还产生多种维持妊娠的激素，是一个重要的内分泌器官
。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代，胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊

、鳃丝等与母体组织紧密结合，以达到母子间物质的交换，这样的结构称假胎盘
。绒毛膜是由滋养层和胚外中胚层的壁层构成。胚泡植入子宫内膜后，在胚泡表面形成许多绒毛样的突起，以细胞滋养层为中轴
，外裹合体滋养层，称初级干绒毛
。胚外中胚层长入初级干绒毛的中轴，使初级干绒毛变成了次级干绒毛
。当绒毛膜的胚外中胚层内形成血管网和结缔组织，并与胚体内的血管相通时，次级干绒毛改称三级干绒毛
。三级干绒毛末端的细胞滋养层细胞形成细胞滋养层壳

。随着胚胎发育
，丛密绒毛膜与基蜕膜共同构成了胎盘
，而平滑绒毛膜则和包蜕膜一起逐渐与壁蜕膜融合
。

实验室分离的兔胎盘绒毛膜滋养层采用-DNA酶联合消化法结合密度梯度离心法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的兔胎盘绒毛膜滋养层经Cytokeratin-7免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件：PLL（0.1mg/ml）

培养基：含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气
，95%；CO2
，5%

兔胎盘绒毛膜滋养层体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

取材→分离→培养和维持

1、取材

人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件
，直接影响细胞的体外培养。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鲜和保鲜

② 应严格无菌

③ 防止机械损伤

④ 去除无用组织和避免干燥

⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等

⑥ 作好记录

2
、分离

人或动物体内(或胚胎组织)由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来。

(1)悬浮细胞的分离方法

组织材料若来自血液、羊水
、胸水或腹水的悬液材料，的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞
。

(2)实体组织材料的分离方法

对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法(物理裂解)和消化分离法。

① 机械分散法

特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织
。

② 消化分离法

组织消化法是把组织剪切成较小团块(或糊状)
，应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状
，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散
，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液
，接种培养后
，细胞容易贴壁生长。

小鼠热休克蛋白20(Hsp-20)ELISA 试剂盒

Human urinary protein (UP) ELISA Kit 人尿蛋白(UP)检测试剂盒

HumancytokeratinHighMolecularWeight,CK-HMWELISAKit 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

GuineapigleukoieneD4,LT-D4检测试剂盒豚鼠白三烯D4(LTD4)检测试剂盒规格
：96T/48T

真菌/酵母细胞壁可溶性总蛋白制备试剂盒20次

MouseCA724ELISAKit小鼠肿瘤标志物(CA724)检测试剂盒规格：96T/48T

IL1RN重组大鼠 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 标签) Protein

GABA/KLH γ1氨基偶联血蓝蛋白 1mgGABA/KLH γ1氨基偶联血蓝蛋白

CD22重组人 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein

IL36G Protein Human 重组人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169)

KIT Protein Mouse 重组小鼠 c-kit / CD117 蛋白

GABA/KLH γ1氨基偶联血蓝蛋白 1mgGABA/KLH γ1氨基偶联血蓝蛋白

IL36G Protein Human 重组人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169)

IL1RN重组大鼠 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 标签) Protein

KIT Protein Mouse 重组小鼠 c-kit / CD117 蛋白

CD22重组人 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein

豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human cytokeratin 20 (CK-20) ELISA Kit 人细胞角蛋白20(CK-20)检测试剂盒

Humanai-scleroderma70aibody,SCL70/topoⅠELISAKit 人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCyclin-D2检测试剂盒人细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA规格
：96T/48T

组织FLT3激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanPregnancySpecificβ1Glycoprotein,SP1/PSβ1-GELISAKit人特异性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)检测试剂盒规格：96T/48T

兔胎盘绒毛膜滋养层细胞人周期素依赖性激酶5(CDK-5)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人周期素依赖性激酶4(CDK-4)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人周期素依赖性激酶2(CDK-2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

人重组激活基因2(RAG-2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月
。

T-25培养瓶充满培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。本公司的所有产品仅用于科学研究或者工业科研等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用