實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

兔視網膜血管周分離自視網膜微血管組織 ；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞 ，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內皮細胞的細胞 ，可以收縮 。周細胞嵌入毛細血管內皮細胞的基膜中 ，通過物理接觸和旁分泌信號與內皮細胞進行細胞通訊 ，監視和穩定內皮細胞的成熟過程 。此外 ，周細胞還具有調控毛細血管血流量 、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用 ，其多功能性是目前研究的熱點之一 ，所以對血管周細胞的生物學特征 、標記物 、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料 。周細胞產生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量 。周細胞和內皮細胞之間共同擁有一個基膜 ，基膜上有多種細胞連接 ，包括多種整合素 、神經鈣黏素 、纖連蛋白以及接合素 。它還參與毛細血管直徑的雙向調控 ；毛細血管受損時 ，周細胞還可增殖 ，分化為內皮細胞和成纖維細胞 。

方法簡介 ：

實驗室分離的兔視網膜血管周采用膠原酶-聯合消化法及不鏽鋼網篩過濾法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的兔視網膜微血管周經α-SMA免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

兔視網膜微血管周體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠/離子轉運ATP酶β4肽(ATP1β4)檢測試劑盒  ，英文名 ： ATP1β4 ELISA Kit

Monkey apoprotein B100 (apo-B100) ELISA Kit 猴載脂蛋白B100(apo-B100)檢測試劑盒

RatE-SelectinELISAkit 大鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGHRPELISAKit大鼠生長激素釋放多肽

細胞鈣調神經0酸酶(CALCINEURIN;PP2B)活性定0比色法定量檢測試劑盒20次

Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAKit大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

TNFRSF11B重組食蟹猴 Osteoprotegerin / TNFRSF11B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

Mcl-1(myeloid cell leukemia 1 0.5mgMcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓樣細胞白血病-1抗原

KIT重組人 c-KIT / CD117 蛋白 Protein

IL11 Protein Human 重組人 IL11 / Interleukin 11 / IL-11 蛋白

CDCP1 Protein Mouse 重組小鼠 CDCP1 蛋白

Mcl-1(myeloid cell leukemia 1 0.5mgMcl-1(myeloid cell leukemia 1) peptide 髓樣細胞白血病-1抗原

IL11 Protein Human 重組人 IL11 / Interleukin 11 / IL-11 蛋白

TNFRSF11B重組食蟹猴 Osteoprotegerin / TNFRSF11B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CDCP1 Protein Mouse 重組小鼠 CDCP1 蛋白

KIT重組人 c-KIT / CD117 蛋白 Protein

豚鼠纖溶酶抗纖溶酶複合物(PAP)檢測試劑盒  ，英文名 ： PAP ELISA Kit

Two human protein disulfide isomerase (PDI) ELISA Kit 人蛋白質二硫鍵異構酶(PDI)檢測試劑盒

MonkeyVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3ELISAkit血管內皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBMG/Beta2-MGELISAKit大鼠β2微球蛋白

細菌內生孢子(ENDOSPORE)染色試劑盒50次

RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅠ,MHCⅠ/RLAⅠELISAKit兔主要組織相容性複合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

兔視網膜微血管周細胞生長因子   英文名稱 ：   Human Growth Factor   規格 ：      英文縮寫 ：   GF

生長激素釋放多肽   英文名稱 ：   Human Growth Hormone Releasing Peptide   規格 ：      英文縮寫 ：   GHRP

生長激素   英文名稱 ：   Human Growth Hormone   規格 ：      英文縮寫 ：   GH

人三0酸鳥苷環水解酶1   英文名稱 ：   Human Guanosine 5′-iphosphate Cyclohydrolase 1   規格 ：      英文縮寫 ：   GCH1